cosmid基因组文库构建法

基因组文库- 概述

用限制性内切酶切割细胞的整个基因组DNA，可以得到大量的基因组DNA片段，然后将这些DNA片段与载体连接，再转化到细菌中去，让宿主菌长成克隆。这样，一个克隆内的每个细胞的载体上都包含有特定的基因组DNA片段，这样的一套克隆就叫做基因组克隆；其中克隆的一套基因组DNA片段就叫做基因组文库.

将某种生物的基因组DNA切割成一定大小的片段，并与合适的载体重组后导入宿主细胞进行克隆。这些存在于所有重组体内的基因组DNA片段的集合，即基因组文库，它包含了该生物的所有基因。 　　

基因组文库是指含有某种生物全部基因随机片段的重组DNA克隆群体.构建文库时,先提纯染色体DNA,通过机械剪切或酶切使之成为一定大小的片段,然后与适当的载体(如λ噬菌体)DNA连接,经体外包装后转染宿主菌,得到一组含有不同DNA片段的重组噬菌体颗粒,含有目的基因片段的重组子可经带标记的探针与基因组文库杂交而筛选出来,用于进一步的研究.

基因组文库- 原理

基因组DNA 文库包括了基因组所有顺序的随机克隆片段。一个好的基因组DNA 文库的大小应足够大，以便包括所有的基因DNA 顺序。DNA 克隆片段也应足够大，其中包括整个基因、连接基因及它们稳定形式所要的侧翼顺序。

为了获得高的克隆效率和较大的插入片段，λ噬菌体载体和质粒经常被使用构建基因组DNA文库。λ噬菌体文库易于操作，噬菌体载体上有多克隆位点。λ噬菌体能容纳10 -50 kb 插入DNA，载体类型应根据所要基因组DNA 片的大小和用途来选择。

构建一个基因组DNA文库的基本步骤：

① 分离纯化基因组DNA ；

② 切割DNA 成合适大小的片段以用于克隆；

③ 载体DNA 的制备；

④ 把基因组DNA 片段和载DNA 连接；

⑤ 包装重组分子；

⑥ 测定入噬菌体滴度；

⑦ 扩增DNA 文库；

⑧ 评估文的质量。

吉赛生物cosmid基因组文库构建法

cosmid（黏粒/柯斯质粒），指带有黏端位点(cos)的质粒。黏粒是由人工构建的含有λ噬菌体DNA的cos序列和质粒复制子的载体。黏粒的组成包括质粒复制起点（ColE1）、抗生素抗性标记、cos位点，常用的黏粒有SupercosI,pOJ436等。

黏粒有4个特点：

1、具有λ噬菌体的特性。

2、具有质粒的特性。

3、克隆外源DNA的容量大。

4、能与有同源序列的质粒进行重组。所以使用Cosmid构建基因文库具有相当的优势，使用不同的黏粒可以满足不同的需要，如SupercosI文库主要用于构建基因突变株，pOJ436文库主要用于构建异源表达菌株，并且该技术已经广泛用于遗传学研究中。