材料与仪器
步骤
1. 尽管当插入片段大于100 kb 时,YAC克隆是可供选择的基因组DNA大片段克隆方法之一,但该系统的一些特性使之很难被迅速采纳为常规克隆手段。
2. 在复杂的酿酒酵母菌的基因组中,通常所用的YAC只是一个单拷贝。
3. 因此在YAC文库中鉴定一个克隆,其信噪比较之在λ噬菌体载体或粘粒载体文库中鉴定同种的克隆更差。
4. 同时,发展一种针对YAC的高密度筛选方法的努力一直步履维艰,仅取得了十分有限的成功,构建YAC文库时不仅需要百倍的努力和巨大的投入,筛选文库时还要耗费大量的人力物力。因此,如果研
5. 究者希望获得含特定序列DNA的YAC克隆,最为可行的方案是首先安排筛选在某中心实验室保存的已有的文库。
2. 在复杂的酿酒酵母菌的基因组中,通常所用的YAC只是一个单拷贝。
3. 因此在YAC文库中鉴定一个克隆,其信噪比较之在λ噬菌体载体或粘粒载体文库中鉴定同种的克隆更差。
4. 同时,发展一种针对YAC的高密度筛选方法的努力一直步履维艰,仅取得了十分有限的成功,构建YAC文库时不仅需要百倍的努力和巨大的投入,筛选文库时还要耗费大量的人力物力。因此,如果研
5. 究者希望获得含特定序列DNA的YAC克隆,最为可行的方案是首先安排筛选在某中心实验室保存的已有的文库。
6. 最初,YAC文库是用整个棊因组DNA构建的。近来,也有利用携带特定染色体或部分染色体的体细胞杂合体构建文库。
7. 如果靶基因座在染色体上的位置是已知的,那么构建和筛选YAC文库所耗费的人力物力将极大地减少。
7. 如果靶基因座在染色体上的位置是已知的,那么构建和筛选YAC文库所耗费的人力物力将极大地减少。
来源:丁香实验