YAC 实验

蛋白质实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

YAC带有天然染色体所有的功能元件，包括一个着丝粒，一个DNA复制起点，两个端粒。YAC能够容纳长达几百kb的外源DNA，这是质粒和黏粒办不到的。大片段的插入更有可能包含完整的基因，在染色体步移中每次允许更大的步移距离，同时能够减少完整基因组文库所需的克隆数目。

来源：丁香实验

操作方法

YAC文库构建

1. 尽管当插入片段大于100 kb 时，YAC克隆是可供选择的基因组DNA大片段克隆方法之一，但该系统的一些特性使之很难被迅速采纳为常规克隆手段。 2. 在复杂的酿酒酵母菌的基因组中，通常所用的YAC只是一个单拷贝。 3. 因此在YAC文库中鉴定一个克隆，其信噪比较之在λ噬菌体载体或粘粒载体文库中鉴定同种的克隆更差。 4. 同时，发展一种针对YAC的高密度筛选方法的努力一直

YAC文库筛选

1. YAC中心实验室用于筛选文库的方法进展很快。 2. 将一块或多块微量滴定板微孔中的YAC克隆转印到尼龙膜上，用单拷贝探针进行杂交，就可以筛选YAC文库了。 3. 然而，由于杂交实验的信噪比较低以及制备所有的转印尼龙膜所需的花费巨大，绝大多数实验室已采用PCR方法来筛选文库。 4. 这种方法首先是从克隆集中提取DNA，一般每个克隆集代表1~4块微量滴定板。 5.