实验原理
DNA多态性是指DNA碱基顺序的差异性。这种差异性不仅存在于不同的植物之间，也存在于同一种植物的不同个体之间。RFLP多态性是指DNA限制性内切酶酶切片段长度的多态性(restniction fragment length olymophorphism)。由于碱基顺序的差异，在不同的种或同一个种的不同个体之间，它们的基因组DNA限制性内切酶位点的种类和数目不同，经特定的限制性内切酶切割后，所产生的限制性酶切片段在大小（长度）和数目方面自然也存在着差异。通过琼脂糖凝胶电泳分离和溴化乙锭染色，在紫外检测仪下观察，即可直接看到这种差异。电泳分离后，通过Southern杂交也可显示出已知DNA片段的差异。
实验试剂
1. 限制性内切酶
2. 10×限制性内切酶缓冲液
3. 0.5M EDTA(pH 8.0)
4. 溴化乙锭
5. 琼脂糖
实验设备
1. 电泳仪和电泳槽
2. 微量离心管
3. 低温冰箱
4. 37℃水浴锅
实验材料
从不同植物或同一植物不同个体分离出的基因组DNA。
实验步骤
1. 限制性内切酶酶切
1) 将在-20℃冷冻的DNA在冰上融化。
2) 取8支微量离心管按下表所示作好标记，并依次加入所需成分。
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品种I
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品种II
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品种I－1
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品种II－2
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单酶切 1#
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双酶切 2#
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单酶切 3#
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双酶切 4#
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单酶切 5#
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双酶切 6#
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单酶切 7#
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双酶切 8#
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DNA
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10
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10
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10
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10
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10
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10
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10
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10
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10×缓冲液
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2
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2
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2
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2
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2
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2
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2
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2
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Eco R I
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1
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1
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1
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1
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1
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1
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1
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Hind III
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1
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1
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1
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1
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无菌水
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7
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6
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7
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6
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7
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6
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7
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6
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总体积(ul)
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20
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20
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20
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20
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20
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20
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20
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20
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3) 混匀，慢速离心2秒，使溶液全部聚于管底。
4) 37℃保温2－3小时。
5) 加入1／10体积的0.5M EDTA溶液终止反应。
2. 琼脂糖凝胶电泳分析
