丁香实验_LOGO
登录
提问
我要登录
|免费注册
点赞
收藏
wx-share
分享

植物基因组DNA的RFLP

互联网

1175

实验原理

DNA多态性是指DNA碱基顺序的差异性。这种差异性不仅存在于不同的植物之间,也存在于同一种植物的不同个体之间。RFLP多态性是指DNA限制性内切酶酶切片段长度的多态性(restniction fragment length olymophorphism)。由于碱基顺序的差异,在不同的种或同一个种的不同个体之间,它们的基因组DNA限制性内切酶位点的种类和数目不同,经特定的限制性内切酶切割后,所产生的限制性酶切片段在大小(长度)和数目方面自然也存在着差异。通过琼脂糖凝胶电泳分离和溴化乙锭染色,在紫外检测仪下观察,即可直接看到这种差异。电泳分离后,通过Southern杂交也可显示出已知DNA片段的差异。

实验试剂

1. 限制性内切酶

2. 10×限制性内切酶缓冲液

3. 0.5M EDTA(pH 8.0)

4. 溴化乙锭

5. 琼脂糖

实验设备

1. 电泳仪和电泳槽

2. 微量离心管

3. 低温冰箱

4. 37℃水浴锅

实验材料

从不同植物或同一植物不同个体分离出的基因组DNA。

实验步骤

1. 限制性内切酶酶切

1) 将在-20℃冷冻的DNA在冰上融化。

2) 取8支微量离心管按下表所示作好标记,并依次加入所需成分。

品种I

品种II

品种I-1

品种II-2

单酶切 1#

双酶切 2#

单酶切 3#

双酶切 4#

单酶切 5#

双酶切 6#

单酶切 7#

双酶切 8#

DNA

10

10

10

10

10

10

10

10

10×缓冲液

2

2

2

2

2

2

2

2

Eco R I

1

1

1

1

1

1

1

Hind III

1

1

1

1

无菌水

7

6

7

6

7

6

7

6

总体积(ul)

20

20

20

20

20

20

20

20

3) 混匀,慢速离心2秒,使溶液全部聚于管底。

4) 37℃保温2-3小时。

5) 加入1/10体积的0.5M EDTA溶液终止反应。

2. 琼脂糖凝胶电泳分析

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序