PCR 抑制物的来源与一般作用机制

PCR 抑制物的来源包括内源性与外源性两种

1. 内源性

天然存在标本中的组成成分。如：免疫球蛋白、蛋白酶、血红蛋白及其代谢产物、血红蛋白中的乳铁蛋白、肌红蛋白、脂类、黏蛋白、尿素、离子、胆盐、多糖等。

2. 外源性

外部引入的抑制物。如：肝素抗凝剂、纤维素和硝酸纤维素、手套滑石粉、标本容器或采样器材上含有的抑制物

二、PCR 抑制物一般作用机制

PCR 抑制物中大部分的作用机制尚不完全清楚，但基本可以归为三类：

1. 干扰核酸提取过程中的细胞裂解；

2. 降解或包裹核酸；

3. 热稳定 DNA 聚合酶失活。

1. 干扰核酸提取过程中的细胞裂解

细胞裂解，核酸释放使得核酸与酶作用产生扩增。如果细胞裂解不完全，核酸释放不完全，就不会产生扩增。常见的简单处理：煮沸，优点：省时，操作简单。缺点：煮沸释放的 DNA 有时不能完全与结构蛋白或 DNA 结合蛋白分离，从而出现扩增抑制作用。单独煮沸的方法会降低扩增敏感性。

2. 热稳定 DNA 聚合酶失活

腐殖化合物是环境样本中最常见的抑制物，其可能是通过对 Mg²⁺的螯合作用而抑制聚合酶活性。

3. 降解或包裹核酸

DNA 可因为一些物理、化学或酶等因素作用而出现降解，如贮存的扩增产物在扩增后电泳时，有时出现的条带模糊，就是因为 DNA 的降解所致。DNA 的一级结构不稳定，会因为水解、非酶甲基化、氧化损伤和酶降解等出现降解。

细胞中存在核酸酶，如果核酸酶处理不干净，残留在纯化的核酸样本中，从而降解靶核酸。微生物如细菌产生的限制性内切酶也会是一个降解 DNA 的因素。有些细菌的 DNA 酶属于热稳定的核酸酶，在扩增中期可水解基因组和引物 DNA。

核酸和引物也因为其不能与 DNA 聚合酶结合而出现不扩增。如蛋白质、多糖、细胞碎片、脂类等对 PCR 的抑制作用，很可能就是通过对 DNA 的物理包裹作用而使其不能与聚合酶接触。

乳胶手套上滑石粉对 PCR 扩增影响可能会通过其对 DNA 的非特异结合作用进行的。因为 DNA 可结合至玻璃、二氧化硅等上，这也是采用硅吸附方法提取核酸的基本原理。

1. 去除 PCR 抑制物；
2. 增加靶核酸浓度，使其能达到特定 PCR 的测定范围；
3. 增加样本的均一性，以保证测定的精密度和重复性。