实时 PCR
最新修订时间：
材料与仪器
cDNA 样品 rRNA 引物和探针 目的基因的引物和探针 Tag Man Universal PCR Master Mix 超纯水
序列监测仪
序列监测仪
步骤
一、材料
1. 缓冲液、溶液和试剂
来自方案 5 的 cDNA 样品
20X18SrRNA 引物和探针（AppliedBiosystems)
20X 目的基因的引物和探针（AppliedBiosystems)
2XTagManUniversalPCRMasterMix(4304437,AppliedBiosystems,FosterCity,CA)
DEPC 处理的超纯水 (BiotecxLaboratories)(储存于 4°C)
试剂储存于-20°C
2. 特殊货备
AppliedBiosystems7700 序列监测仪（PEAppliedBiosystems，FosterCity，CA)
二、方法
1. 稀释来自方案 5 的 cDNA，1:100
2. 用 1ul 稀释溶液做对照反应，10ul 做目的反应
3.PCR 循环条件
(1)50°C，2 min。
(2)95°C，10 min。
(3)PCR 循环--n 个循环。
a.95°C,15s。
b.60°C,1min。
1. 缓冲液、溶液和试剂
来自方案 5 的 cDNA 样品
20X18SrRNA 引物和探针（AppliedBiosystems)
20X 目的基因的引物和探针（AppliedBiosystems)
2XTagManUniversalPCRMasterMix(4304437,AppliedBiosystems,FosterCity,CA)
DEPC 处理的超纯水 (BiotecxLaboratories)(储存于 4°C)
试剂储存于-20°C
2. 特殊货备
AppliedBiosystems7700 序列监测仪（PEAppliedBiosystems，FosterCity，CA)
二、方法
1. 稀释来自方案 5 的 cDNA，1:100
2. 用 1ul 稀释溶液做对照反应，10ul 做目的反应
3.PCR 循环条件
(1)50°C，2 min。
(2)95°C，10 min。
(3)PCR 循环--n 个循环。
a.95°C,15s。
b.60°C,1min。
来源：丁香实验
