🔥 小鼠的社会等级实验

小鼠的行为学实验中，将互不相识且不同基因型的小鼠（同性，一般用雄性小鼠）放在同一笼饲养一段时间，以形成一定的社会等级，并通过钻管对抗实验（tube test）来测试并得出一笼中每只小鼠的社会等级，比较并得出某基因对小鼠社会等级的影响。

小鼠的行为学实验中，将互不相识且不同基因型的小鼠（同性，一般用雄性小鼠）放在同一笼饲养一段时间，以形成一定的社会等级，并通过钻管对抗实验（tube test）来测试并得出一笼中每只小鼠的社会等级，比较并得出某基因对小鼠社会等级的影响。

小鼠、钻管、塑料棒、75% 酒精、纸巾

白纸、笔、计数器、计时器

（1）实验准备（以 Src3+/- 举例）：

实验鼠为成年 C57BL/6J 雄鼠，小鼠的年龄相近，体重相差不超过 15%。使用内直径 3 厘米，长 30 厘米透明塑料管子。每笼两只 WT 小鼠和两只 Src3+/-  小鼠混合饲养，并用粗马克笔在小鼠尾巴靠近臀部端做标记，WT 鼠用黑笔划「一」和「二」，Src3+/-  鼠用红笔划「一」和「二」，并将笼子也编号。标记后每 3 天查看并加深标记。

（2）实验设计（三个阶段）：

适应 3 天，训练 3 天，测试至少 4 天。测试时小鼠在管中两两对抗，每笼采用循环赛制，小鼠等级由它获胜次数评估得出，连续 4 天小鼠等级保持相同即等级固定。

1）适应：

适应是为了减少焦虑。把管子用双面胶粘在台子上固定好，把小鼠放在实验台子上，让它在管子周围自由活动，这样适应 3 天。

2）训练：

目的是让小鼠熟悉测试流程和环境，让小鼠知道通过管子到另一端是安全的。行为房应安静且灯光微弱，温度适宜。准备塑料棒、75% 酒精、纸巾、白纸、笔，计数器和计时器。把小鼠放在桌子上探索 1 min，然后让它通过管子，如果小鼠在里面很久不动或者撤退，就用塑料棒拨拨它的尾巴。所有鼠需通过管子每天 10 次，其中每一端各通过 5 次。训练 3 天，每只鼠每天 10~15 min。

3）测试：

小鼠在管中两两对抗测试至少持续 4 天，每天上下午各一次；

a. 画出管子中线，测试前每只鼠再训练通过管子一次。

b. 两只小鼠分别放置在两个管口，两个人同时将小鼠头送进管口，同时释放并开始计时和拍照。

c. 测试顺序随机，每笼 4 只小鼠应比 6 次才能比完，每只小鼠都比了两次，每只小鼠的这两次测试应该从不同的管口钻进去，每次测试时长通常少于 30 秒或1分钟，特殊情况在 2 min 内两只鼠都没撤退应停止测试；

d. 把其他小鼠推出管外的小鼠获胜，撤退出管外的小鼠失败，失败小鼠四只爪子都退出管外停止计时；

e. 记录小鼠每次胜败结果和决出胜负花费的时间，每笼的 4 只小鼠，根据它们相互的胜败情况进行排名并统计。小鼠等级由它与其他 3 只小鼠的次数评估出，一般认为同笼 4 只鼠若在连续 4 天都保持了相同等级则等级固定；

f. 每次测试完让两只鼠在桌子上自由探索 1 min，然后放回原笼和其他鼠一起休息 2 min，来减少当前胜利或失败可能带来的影响。

论文中实验举例：

Src3+/-  小鼠的社会等级：

社会等级需要动物们在长期相处中的接触、打斗和撕咬等动作和行为中，通过这些残酷的遭遇将社会等级固定下来，在以后的相处中它们都将利用社交识别记忆将个人身份识别出来，从而保持这种社会等级。

实验室的前期工作中，我们通过 Y 迷宫和 T 迷宫以及其他行为学测试发现，Src3+/- 小鼠的记忆等功能没有表现出差异。所以我们再利用钻管对抗实验，来测试 Src3 敲除对小鼠的社会等级的影响。同笼饲养的 Src3+/- 小鼠和 WT 小鼠，我们将它们成对同时地放进透明塑胶管的两端中，进行两两对抗。

我们通过统计并分析 Src3+/- 小鼠和 WT 小鼠获得胜利的比率，对抗获得胜利所需的时间，以及根据同一笼中小鼠对抗获胜情况对 WT 小鼠和 Src3+/- 小鼠评定的社会等级排名，排名第一名为最高，排名的数字越大等级越低。

发现在同一笼饲养的小鼠对抗实验中，Src3+/- 小鼠比 WT 小鼠的胜率（图1B）和社会等级都要低（图1C），但它们获得胜利所需的时间是没有差别的（图1D）。说明 Src3+/- 小鼠没有 WT 小鼠那么争强好胜，在一个群体中的社会地位要低一些。

图1 钻管对抗实验测试 Src3+/- 雄性小鼠的社会等级

A. 同一笼中 WT 小鼠 1 号和 2 号，Src3+/- 小鼠 1 号和 2 号，钻进管中两两对抗的示意图。

B. 同一笼中 WT 小鼠和 Src3+/- 小鼠对抗获得胜利的比率。

C. WT 小鼠和 Src3+/- 小鼠社会等级排名，排名的数字越小等级越高。

D. 同一笼中 WT 小鼠和 Src3+/- 小鼠对抗达到胜利所需的时间。

N = 12, unpaired t-test，~E_p_~8lt~J_0.05，N.S, No significance。