🔥 磁珠法提取 DNA

磁珠法核酸纯化技术采用了纳米级磁珠微珠，这种磁珠微珠的表面标记了一种对核酸有吸附作用的特定活性官能团，能同核酸发生吸附反应，从而达到核酸与杂质分离的目的，进而获得纯化的核酸。

用于 DNA 的提取。

① 磁珠

② 磁力架

③ 无水乙醇

1、样本处理：核酸必须从细胞或其他生物物质中释放出来。

（1）植物组织：液氮研磨或在特殊裂解液中电动匀浆；

（2）动物组织：液氮研磨或裂解液中手动/电动匀浆；

（3）血细胞：应用红细胞裂解液处理；

（4）细胞：胰酶处理或蛋白酶 K 处理。

2、DNA 纯化：磁珠提前 30 min 从冰箱拿出平衡。磁珠振荡混匀，取处理完成的裂解液 50 μl 中加入 50 μl 磁珠悬液，按 1:1 充分混匀，室温静置 5 min，将悬浊液安放在磁力架上，静置 5 min 至上清清澈，去上清，用 75% 乙醇或 80% 乙醇 200 μl 清洗沉淀（现用现配），旋转 ep 管静置 30 s，弃上清。重复清洗 2 次，干燥 5~10 min。

3、DNA 溶出：待磁珠无乙醇味，从磁力架上取下 ep 管，用 dH₂O 或 TE 溶出 DNA，充分混匀， 勿用枪头刮蹭磁珠。静置 2 min。再将 ep 管安放在磁力架上，上清清澈后吸取上清至新的 ep 管， 即可得到 DNA 溶液。

1. 适用于大多数动植物组织及培养细胞、全血、尤其适用于微量样品的 DNA 提取，但对于裂解液过于粘稠的样品不适用。

2. 样本处理时一定要快速，减少与空气接触发生降解；液氮的量也要适当。

3. 核酸如果不立即使用，则需至少在 -20 ℃ 保存备用。

4. 震荡混匀时一定要让磁珠和液体充分接触，使磁珠更好的吸附 DNA。

1. 磁珠越多，提取效果越好

答：磁珠的主要特点是既可以分散于液体中，也可以在外加磁场作用下以固态方式和液相分离，任何试剂体系，磁珠和液体的比例都应该是有一定阈值的，超过一定的比例，过多的磁珠将因为无法均匀分散于液体中，而丧失其分散的特性，也使得洗涤过程中无法充分增加核酸磁珠和液体接触的效率。

而过量的磁珠也会吸附更多的杂质，对于除杂的效果影响非常大。

2. 洗涤次数越多，提取效果越好

答：增加洗涤次数确实有利于提纯核酸，但考虑到每次洗涤都会损失一定量的核酸，且增加了核酸断裂水解的可能性，所以一般来说洗涤次数控制在 2~4 次为宜。

3. 某一种磁珠好，就应该在所有试验中效果都好

答：磁珠的种类是多种多样的，粒径大小不同，分散性不同，磁响应时间不同，包被基础基质不同，外层修饰官能团不同，包被密度不同，官能团臂长不同，会导致磁珠特性千差万别。所以不同磁珠所适应的实验和体系也是不同的。很少有一种磁珠能适用于所有实验的情况，除了固定的试剂盒配合，多数情况下，磁珠和试剂体系都要做预实验进行调整。