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人类免疫缺陷病毒抗体检测方法

相关实验:人类免疫缺陷病毒病毒及其检验

最新修订时间:

简介

HIV 抗体检测可用于诊断、血液筛查、监测等。大多数人从 HIV 感染到测到抗体大约需要 6~12 周的时间,在这段时间,HIV 抗体检测不能识别出在抗体形成前即处于窗口期的感染者。窗口期的存在,使患者输入 HIV 抗体阴性的血液后仍可感染 HIV。HIV 感染 6 个月后所有感染者均抗体阳性。检测抗体的假阳性和假阴性率都很低,准确率可达 99%,且价格低廉,可以应用于整个病程的监测,HIV 抗体在病毒感染后的整个感染过程中长期稳定地存在并可被检测到。

原理

人类免疫缺陷病毒抗体检测方法的基本原理是检测血清中 HIV 抗体可作为判定 HIV 感染的证据。HIV 抗体检测是一种间接试验,通过发现抗体而确定感染的存在。这种证据不能确定病毒的存在。

材料与仪器

步骤

人类免疫缺陷病毒抗体检测方法的基本过程可分为如下几步:

HIV 抗体检测程序分为筛查试验(包括初筛和复检)和确证试验。根据检测目的选用符合要求的初筛试剂对样品进行初筛检测,对呈阴性反应的样品,可出具 HIV 抗体阴性(-)报告;对呈阳性反应的样品,需要进一步做复检试验和确证试验。复检试验应使用原有试剂和另外一种不同原理(或厂家)的试剂,或另外两种不同原理或不同厂家的试剂进行。如两种试剂复检均呈阴性反应,则报告 HIV 抗体阴性(-);如均呈阳性反应,或一阴一阳,须送艾滋病确证实验室进行确证试验。艾滋病检测初筛实验室复检判定为阳性反应的样品,确证实验室可以直接进行确证试验。

(一)HIV 抗体筛查试验用于筛查试验的方法要求敏感性高,不能出现假阴性,但允许有少量假阳性。常用以下几种方法:

A 酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA):是最常用的初筛方法,能同时检测大量样品,适应于大规模普查。可使用血液、唾液、尿液样品,ELISA 多为单纯 HIV 抗体检测试剂。HIV 抗原抗体联合检测试剂可同时检测血液中的 HIV p24 抗原和 HIV-1/2 抗体。HIV 抗原或抗体包被于固相载体,加入待检样品和酶标记的 HIV 抗原或抗体,加底物显色,用酶标仪测定结果。

B 化学发光或免疫荧光试验:这类试剂采用发光或荧光底物,既可检测抗体,也可联合检测抗原抗体。HIV 抗原或抗体包被于固相载体,加入待检样品和酶或荧光标记的 HIV 抗原或抗体,加发光或荧光底物,用发光或荧光仪测定结果。

C 快速检测(rapid test,RT)试验:这类试验简便快速,一般可在 10~30 分钟内得出检测结果,标本容易采集,只需较少的实验设备,可以直观的判定和解释结果,适用于应急检测、门诊急诊检测。HIV 快速检测试验按原理不同可分为以下三类:

1)免疫渗滤试验:斑点 ELISA 和斑点免疫胶体金(或胶体硒)快速试验,均以硝酸纤维膜为载体,HIV 抗原点状固定在膜上,加入待检样品后,阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。反应时间在 10 分钟以内。有效试验的质控点必须显色。

2)免疫层析试验:以硝酸纤维膜为载体,HIV 抗原线状固定在膜上,加入待检样品(血液或唾液)后,待检样品沿着固相载体迁移,阳性结果在膜上抗原部位显示出有色条带。有效试验的质控带必须显色。

3)明胶颗粒凝集试验:是 HIV 血清抗体检测的一种简便方法。将 HIV 抗原致敏明胶颗粒作为载体,加入待检样品。当待检样品含有 HIV 抗体时,明胶颗粒与抗体发生凝集反应,根据凝集情况判读结果。明胶颗粒凝集试验的试剂有两种:同时检测 HIV-1 和 HIV-2 抗体以及分别检测 HIV-1 和 HIV-2 抗体。

(二)HIV 抗体确证试验依据《全国艾滋病检测技术规范(2009 年版)》,HIV 确证方法有免疫印迹试验(Western blot,WB)、条带免疫试验、放射免疫沉淀试验(RIPA)及免疫荧光试验(IFA)等。

A 免疫印迹试验是目前最常用的方法,原理是显示待测血清中特异的 HIV 抗体蛋白。将 HIV 裂解后,其不同的蛋白成分通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-polyacrylamidegel)电泳,使 HIV 蛋白按其分子量大小不同,分为不同的区带,排列于凝胶上,形成若干条特异的 HIV 蛋白区域。通过印迹技术转移到硝酸基纤维膜上,将硝酸基纤维膜切成细的试纸条,加入待测血清共同孵育,抗 HIV 的特异蛋白抗体与其对应的抗原蛋白结合。漂洗掉非特异结合的血清成分,加入酶标抗人 IgG 共同孵育,使酶标抗体与被结合的待测血清抗体结合,漂洗后与酶底物反应,显色。不同的特异抗体在硝酸基纤维膜上的特异 HIV 蛋白区域形成颜色沉淀带,通过肉眼可以观察反应部位上的颜色反应,来判断结果。由于不同的抗原蛋白在诊断中有不同的意义,因此不同带型的出现,可以为诊断提供较准确的信息。

来源:丁香实验

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