人类免疫缺陷病毒抗体检测方法

HIV 抗体检测可用于诊断、血液筛查、监测等。大多数人从 HIV 感染到测到抗体大约需要 6~12 周的时间，在这段时间，HIV 抗体检测不能识别出在抗体形成前即处于窗口期的感染者。窗口期的存在，使患者输入 HIV 抗体阴性的血液后仍可感染 HIV。HIV 感染 6 个月后所有感染者均抗体阳性。检测抗体的假阳性和假阴性率都很低，准确率可达 99％，且价格低廉，可以应用于整个病程的监测，HIV 抗体在病毒感染后的整个感染过程中长期稳定地存在并可被检测到。

人类免疫缺陷病毒抗体检测方法的基本原理是检测血清中 HIV 抗体可作为判定 HIV 感染的证据。HIV 抗体检测是一种间接试验，通过发现抗体而确定感染的存在。这种证据不能确定病毒的存在。

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人类免疫缺陷病毒抗体检测方法的基本过程可分为如下几步：

HIV 抗体检测程序分为筛查试验（包括初筛和复检）和确证试验。根据检测目的选用符合要求的初筛试剂对样品进行初筛检测，对呈阴性反应的样品，可出具 HIV 抗体阴性（-）报告；对呈阳性反应的样品，需要进一步做复检试验和确证试验。复检试验应使用原有试剂和另外一种不同原理（或厂家）的试剂，或另外两种不同原理或不同厂家的试剂进行。如两种试剂复检均呈阴性反应，则报告 HIV 抗体阴性（-）；如均呈阳性反应，或一阴一阳，须送艾滋病确证实验室进行确证试验。艾滋病检测初筛实验室复检判定为阳性反应的样品，确证实验室可以直接进行确证试验。

（一）HIV 抗体筛查试验用于筛查试验的方法要求敏感性高，不能出现假阴性，但允许有少量假阳性。常用以下几种方法：

A 酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）：是最常用的初筛方法，能同时检测大量样品，适应于大规模普查。可使用血液、唾液、尿液样品，ELISA 多为单纯 HIV 抗体检测试剂。HIV 抗原抗体联合检测试剂可同时检测血液中的 HIV p24 抗原和 HIV-1/2 抗体。HIV 抗原或抗体包被于固相载体，加入待检样品和酶标记的 HIV 抗原或抗体，加底物显色，用酶标仪测定结果。

B 化学发光或免疫荧光试验：这类试剂采用发光或荧光底物，既可检测抗体，也可联合检测抗原抗体。HIV 抗原或抗体包被于固相载体，加入待检样品和酶或荧光标记的 HIV 抗原或抗体，加发光或荧光底物，用发光或荧光仪测定结果。

C 快速检测（rapid test，RT）试验：这类试验简便快速，一般可在 10~30 分钟内得出检测结果，标本容易采集，只需较少的实验设备，可以直观的判定和解释结果，适用于应急检测、门诊急诊检测。HIV 快速检测试验按原理不同可分为以下三类：

1）免疫渗滤试验：斑点 ELISA 和斑点免疫胶体金（或胶体硒）快速试验，均以硝酸纤维膜为载体，HIV 抗原点状固定在膜上，加入待检样品后，阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。反应时间在 10 分钟以内。有效试验的质控点必须显色。

2）免疫层析试验：以硝酸纤维膜为载体，HIV 抗原线状固定在膜上，加入待检样品（血液或唾液）后，待检样品沿着固相载体迁移，阳性结果在膜上抗原部位显示出有色条带。有效试验的质控带必须显色。

3）明胶颗粒凝集试验：是 HIV 血清抗体检测的一种简便方法。将 HIV 抗原致敏明胶颗粒作为载体，加入待检样品。当待检样品含有 HIV 抗体时，明胶颗粒与抗体发生凝集反应，根据凝集情况判读结果。明胶颗粒凝集试验的试剂有两种：同时检测 HIV-1 和 HIV-2 抗体以及分别检测 HIV-1 和 HIV-2 抗体。

（二）HIV 抗体确证试验依据《全国艾滋病检测技术规范（2009 年版）》，HIV 确证方法有免疫印迹试验（Western blot，WB）、条带免疫试验、放射免疫沉淀试验（RIPA）及免疫荧光试验（IFA）等。

A 免疫印迹试验是目前最常用的方法，原理是显示待测血清中特异的 HIV 抗体蛋白。将 HIV 裂解后，其不同的蛋白成分通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶（SDS-polyacrylamidegel）电泳，使 HIV 蛋白按其分子量大小不同，分为不同的区带，排列于凝胶上，形成若干条特异的 HIV 蛋白区域。通过印迹技术转移到硝酸基纤维膜上，将硝酸基纤维膜切成细的试纸条，加入待测血清共同孵育，抗 HIV 的特异蛋白抗体与其对应的抗原蛋白结合。漂洗掉非特异结合的血清成分，加入酶标抗人 IgG 共同孵育，使酶标抗体与被结合的待测血清抗体结合，漂洗后与酶底物反应，显色。不同的特异抗体在硝酸基纤维膜上的特异 HIV 蛋白区域形成颜色沉淀带，通过肉眼可以观察反应部位上的颜色反应，来判断结果。由于不同的抗原蛋白在诊断中有不同的意义，因此不同带型的出现，可以为诊断提供较准确的信息。