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氯化三苯基四氮唑(TTC)法测定花粉活力

相关实验:花粉活力的测定

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简介

在作物杂交育种、作物结实机理和花粉生理的研究中,常涉及花粉活力的鉴定。 通过花粉活力的测定,可以了解花粉的可育性,并掌握不育花粉的形态和生理特征。掌握花粉活力快速测定的方法,是进行雄性不育株的选育、杂交技术的改良以及揭示内外因素对花粉育性和结实率影响的基础。

原理

氯化三苯基四氮唑(TTC)法测定花粉活力的基本原理是具有活力的花粉呼吸作用较强,其产生的 NADH2 或 NADPH2,可将无色的TTC(2,3,5-氯化三苯基四氮唑)还原成红色的 TTF(三苯基甲臜)而使其本身着色,无活力的花粉呼吸作用较弱,TTC 的颜色变化不明显,故可根据花粉吸收 TTC 后的颜色变化判断花粉的生活力。

材料与仪器

器材:载玻片、显微镜、玻璃棒、恒温箱、培养皿、滤纸、载玻片与盖玻片、镊子、棕色试剂瓶、烧杯、量筒、天平。

试剂:

① 葫芦科植物、水稻、小麦等花粉。

② 培养基:称量 10 g 蔗糖、1 mg 硼酸、0.5 g 琼脂与 90 mL 水放入烧杯中,在 100 ℃ 水浴中熔化,冷却后加水至 100 mL 备用。

③ 0. 5% TTC溶液:称 0.5 g TTC 放入烧杯中,加入少许 95% 酒精使其溶解,然后用蒸馏水稀释至 100 mL。溶液避光保存,若发红时,则不能再用。

步骤

氯化三苯基四氮唑(TTC)法测定花粉活力的基本过程可分为如下几步:

A 采集植物的花粉,取少许放在干洁的载玻片上。

B 加 1~2 滴 0.5% TTC 溶液,搅匀后盖上盖玻片,置 35 ℃ 恒温箱中。

C 10~15 min 后镜检,凡被染为红色的花粉活力强,淡红色次之,无色者为没有活力或不育花粉。观察 2~3 张片子,每片取 5 个视野,统计花粉的染色率,以染色率表示花粉的活力百分率。

来源:丁香实验

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