氯化三苯基四氮唑（TTC）法测定花粉活力

在作物杂交育种、作物结实机理和花粉生理的研究中，常涉及花粉活力的鉴定。 通过花粉活力的测定，可以了解花粉的可育性，并掌握不育花粉的形态和生理特征。掌握花粉活力快速测定的方法，是进行雄性不育株的选育、杂交技术的改良以及揭示内外因素对花粉育性和结实率影响的基础。

氯化三苯基四氮唑（TTC）法测定花粉活力的基本原理是具有活力的花粉呼吸作用较强，其产生的 NADH₂ 或 NADPH2，可将无色的TTC（2，3，5-氯化三苯基四氮唑）还原成红色的 TTF（三苯基甲臜）而使其本身着色，无活力的花粉呼吸作用较弱，TTC 的颜色变化不明显，故可根据花粉吸收 TTC 后的颜色变化判断花粉的生活力。

器材：载玻片、显微镜、玻璃棒、恒温箱、培养皿、滤纸、载玻片与盖玻片、镊子、棕色试剂瓶、烧杯、量筒、天平。

试剂：

① 葫芦科植物、水稻、小麦等花粉。

② 培养基：称量 10 g 蔗糖、1 mg 硼酸、0.5 g 琼脂与 90 mL 水放入烧杯中，在 100 ℃ 水浴中熔化，冷却后加水至 100 mL 备用。

③ 0. 5% TTC溶液：称 0.5 g TTC 放入烧杯中，加入少许 95% 酒精使其溶解，然后用蒸馏水稀释至 100 mL。溶液避光保存，若发红时，则不能再用。

氯化三苯基四氮唑（TTC）法测定花粉活力的基本过程可分为如下几步：

A 采集植物的花粉，取少许放在干洁的载玻片上。

B 加 1~2 滴 0.5% TTC 溶液，搅匀后盖上盖玻片，置 35 ℃ 恒温箱中。

C 10~15 min 后镜检，凡被染为红色的花粉活力强,淡红色次之，无色者为没有活力或不育花粉。观察 2~3 张片子，每片取 5 个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的活力百分率。