简介
生物碱是指天然的含氮有机化合物，但不包括氨基酸、蛋白质、核昔、叶咻、胆碱 甲胺等开链的简单脂肪胺。它的氮原子常在环上，生物碱多具有复杂环状结构和较强的生理 活性。植物中的生物碱大多有明显的生理活性。如抗菌消炎、镇痛止喘、抗癌活性、抗中毒性 休克作用等作用，常常作为药材使用。测定植物的总生物碱的含量有助于控制中药材的质 量、反映药材的疗效，以及为保健食品、天然防腐剂的开发提供很好的应用基础研究。
原理
植物生物碱含量的测定的基本原理是生物碱大部分溶于有机溶剂，只有少数可溶于水。在植物体内常与酸结合成盐, 所以提取时应先将植物材料与少量碱混合（如 10% 氨水），使生物碱转成游离状态后用有机溶 剂提取。测定的方法主要有滴定法（直接滴定法和回滴法）、酸性染料比色法和导数分光光度 法。酸性染料比色法在文献中采用较多，被认为是较理想的方法。文献中采用的染料有嗅甲 酚绿、嗅甲酚蓝等，缓冲液也有多种。本实验采用分光光度法，以荷叶为例，以漠甲酚绿缓冲 液为显色剂，以荷叶碱为对照，测定荷叶中总生物碱的含量。
材料与仪器
材料: 荷叶（市售）等植物材料。
器材：可见一紫外分光光度计，电子天平,R201 型旋转蒸发仪。
试剂：
①荷叶碱对照品
②乙醮
③三氯甲烷
④漠甲酚绿
⑤邻苯二甲酸氢钾
⑥氢氧化钠（市售分析纯）
步骤
植物生物碱含量的测定的基本过程可分为如下几步：
1 . 对照品溶液的制备：精密称取荷叶碱约 10 mg, 置于 25 mL 容量瓶中，加三氯甲烷至刻 度，摇匀，精密吸取 2.5 mL 于 25 mL 容量瓶中，加三氯甲烷至刻度，摇匀，备用。
2. 供试品溶液的制备: 取粉碎到一定程度的荷叶粉末适量，用 pH 为 3〜4 的盐酸水溶液 恒温提取 10 h, 过滤，得红棕色稍黏稠的滤液，第一次滤液真空浓缩到一定体积，再过滤，得到 的第二次滤液用氯仿萃取两次，以除去脂肪炷及树脂类杂质，水层调 pH 至 6〜7 过滤以除去 糅质及靴酸盐类杂质，继续加碱液至 pH 为 9 左右即得荷叶生物碱提取液，经旋转蒸发仪蒸 发浓缩成 10 mL 浓缩液，待用。
或者取荷叶，粉碎成粗粉，精密称取约 4 g 于索氏提取器中，加入 80 mL 三氯甲烷，加热 回流提取 4 h, 冷却后过滤，蒸干，残渣加三氯甲烷分次溶解移入 100 mL 容量瓶中，加三氯甲 烷至刻度，摇匀，精密吸取 1 mL 于 25 mL 容量瓶中，加三氯甲烷至刻度，摇匀，备用。也可以 超声波提取，较好的提取条件为 65% 乙醇、料液比 1 : 50（m/V）.pH 5、超声频率 45 kHz、超声时间 0.5 h、超声温度 80°C。
3. 漠甲酚绿缓冲液的制备：精密称取漠甲酚绿（别名：漠甲酚蓝）125 mg, 用 0.2 mol - L 1 NaOH 溶液 12.5 mL 溶解. 加入邻苯二甲酸氢钾 2. 50 mg, 加少量水溶解，转移至 250 mL 容量瓶中，加水至刻度，摇匀，备用。（注：0.05% 漠麝香草酚蓝缓冲液可替代）
4. 标准曲线制作：分别精密吸取 0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL 对照品溶液于试管中（或 5 mL 容量瓶），加三氯甲烷至 5 mL, 振摇，移至分液漏斗中，精密加入漠甲酚绿缓冲液和 0.2 mol - L 1 NaOH 溶液各 1 mL, 摇匀，静置，取澄清的三氯甲烷液在 415 nm 波长处进行 测定，以浓度为纵坐标，吸收值为横坐标，得回归方程迎=Ar+B0
5. 荷叶总生物碱的测定：取三批荷叶，以三氯甲烷加漠甲酚绿缓冲液和 0. 2 mol • L 1 NaOH 溶液为空白，按照 4 标准品含量测定程序，比色结果代入回归方程，计算样品荷叶总生 物碱含量。
6. 结果计算：
c X V
生物碱含量（卩 mol・g・）= —
式中：c 一从标准曲线上查得的生物碱浓度，卩 mol - mL'1；
V 一样品体积,mL；
W—样品重,go
注意事项
1. 不同植物的生物碱种类不同，其提取方法应有所区别。
2. 如果选取的显色染料不同，测定波长需要重新扫描。
来源：丁香实验
