植物维生素C含量的测定

维生素C又称抗坏血酸，是果实中重要组成部分，人体缺乏它就会患坏血病。但人体中一般不能合成维生素C，所需要的维生素C，必须从植物产品中获取。因此，植物产品维生素C含量的测定是植物产品质量，特别是果蔬产品品质的重要指标。

一、试材及用具

1．试材 鲜草莓、鲜枣或干枣。

2． 仪器 恒温箱、紫外-可见分光光度计、高速组织捣碎机、烘箱以及移液管、烧杯、容量瓶等玻璃器皿。

3． 试剂 及配制

（1）4.5mol/L H 2 SO 4 ：将250mL H 2 SO 4 (比重1.84)加入700mL水中，冷却后再用水稀释至1000mL。

（2）85% H 2 SO 4 ：将900mL H 2 SO 4 (比重1.84)加入100mL水中。

（3）2% 2,4-二硝基苯肼溶液：将2,4-二硝基苯肼2g溶解于100mL 4.5mol/L H 2 SO 4 内，过滤。不用时存于冰箱内，每次用前必须过滤。

（4）2% 草酸溶液：溶解20g草酸于700mL水中，稀释至1000mL。

（5）1% 草酸溶液：稀释500mL 2%草酸溶液到1000mL。

（6）1% 硫脲溶液：溶解5g硫脲于500mL 1%草酸溶液中。

（7）2% 硫脲溶液：溶解10g硫脲于500mL 1%草酸溶液中。

（8）1 mol·L-1 HCl：取100mL HCl（12 mol·L-1）加入水中，并稀释至1200mL。

（9）抗坏血酸标准溶液：溶解100mg纯抗坏血酸于100mL 1%草酸中，配成1mL相当于1mg抗坏血酸的溶液。

（10）活性炭：将100g活性炭加到750mL 1mol/L盐酸中，回流1～2h,过滤，用水洗数次，至滤液中无铁离子（Fe3+）为止，然后置于110℃烘箱中烘干。

（11）检验铁离子方法：利用普鲁士蓝反应。取上述滤出液数滴，加入1mL2%亚铁氰化钾于1% HCl等量混合液中，如有铁离子则产生蓝色沉淀。

二、原理

总抗坏血酸包括还原型、氧化型和结合型，样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为氧化抗坏血酸，再与2,4-二硝基苯肼作用生成红色脎，根据脎在硫酸溶液中的含量与总抗坏血酸的含量成正比，进行比色定量。实验全过程中应避光。本实验学习并掌握用比色法测定维生素C的原理和方法。

三、方法步骤

1．样品的制备

（1）鲜样的制备：称100g鲜样和100g 2%草酸溶液，倒入捣碎机中打成匀浆，取10～40g匀浆（含1～2g抗坏血酸）倒入100mL容量瓶内，用1%草酸溶液稀释至刻度，混匀。

（2）干样制备：称1～4g干样（含1～2g抗坏血酸）放入研钵内，加入1%草酸溶液磨成匀浆，倒入100mL容量瓶内，用1%草酸溶液稀释至刻度，混匀。

（3）将（1）或（2）液过滤，滤液备用。不易过滤的样品可用离心除去沉淀，取上清备用。

2．氧化处理

取25mL上述滤液，加入2g活性炭，振摇1min，过滤，弃去最初数毫升滤液。取10mL经氧化的提取液，加入10mL 2%硫脲溶液，混匀。

3．呈色反应

（1）于3支 试管 中各加入4mL上述溶液。1支 试管 作为空白，在其余试管中加入1.0mL 2% 2,4-二硝基苯肼溶液，将所有试管放入37±0.5◦C恒温箱或 水浴 中，保温3h后取出，除空白管外，将所有试管放入冰水中。空白管取出后使其冷到室温，然后加入1.0mL 2% 2,4-二硝基苯肼溶液，在室温中放置10～15min后放入冰水内。其余步骤同样品。

（2）85%硫酸处理：当试管放入冰水后，向每一试管中慢慢滴加入5mL 85%硫酸，需边加入边摇动试管。将试管从冰水中取出在室温放置30min后测定光密度值。

4．测定 用1cm比色杯，以空白液调零点，于500nm波长处测OD值。

5．标准曲线绘制

（1）加2g活性炭于50mL标准溶液中，摇动1min，过滤。

（2）取10mL滤液放入500mL 容量瓶 中，加5.0g硫脲，用1%草酸溶液稀释至刻度（抗坏血酸浓度20μg/mL）。

（3）取5、10、20、25、40、50、60mL稀释液，分别放入7个100mL 容量瓶 中，用1% 硫脲溶液稀释至刻度，使最后稀释液中抗坏血酸的浓度分别为1、2、4、5、8、10、12μg/mL。

（4）按样品测定步骤形成脎并比色测定。

（5）以OD值为纵坐标，以抗坏血酸浓度（μg/mL）为横坐标绘制标准曲线。

6. 结果计算

抗坏血酸的含量：X=(C×V/m)×F×(100/1000)

式中：X——样品中总抗坏血酸含量(mg/100g)

C——由标准曲线查得或由回归方程算得“样品氧化液”中总抗坏血酸的浓度(mg/mL)

V——试样用1%草酸溶液定容的体积(mL)

F——样品氧化处理过程中的稀释倍数