原理
植物体内可溶性糖包括还原糖和非还原糖(主要是蔗糖)。因此测定蔗糖时,须先用盐酸将其水解为还原糖,再测定水解后的总还原糖含量,然后从总还原糖含量减去水解前还原糖含量即为蔗糖含量。
材料与仪器
马铃薯 水果
盐酸溶液 氢氧化钠溶液 酚酞指示剂
分光光度计 电子分析天平 恒温水浴锅 25 ml刻度试管 50 ml容量瓶 100 ml三角瓶 试管架 移液管 移液管架 洗耳球 玻棒
盐酸溶液 氢氧化钠溶液 酚酞指示剂
分光光度计 电子分析天平 恒温水浴锅 25 ml刻度试管 50 ml容量瓶 100 ml三角瓶 试管架 移液管 移液管架 洗耳球 玻棒
步骤
1.葡萄糖标准曲线制作与上述还原糖含量测定相同。
2.样品中蔗糖的水解
精确吸取上述测定还原糖含量的糖分提取液10 ml置于100 ml三角瓶中,加6mol·L-1盐酸10 ml,摇匀,在沸水浴中加热10min,冷却后加入酚酞指示剂一滴,以10﹪氢氧化钠中和至溶液呈微红色,然后将提取液转入50 ml容量瓶中加蒸馏水稀释定容至刻度,待测。
3.样品中总还原糖的测定
取4 支25 ml刻度试管,编号,其中3支(三个重复)分别加入待测液2 ml,1支空白管加
2 ml蒸馏水,然后各管再加入DNS试剂1.5 ml,摇匀,混合液在沸水浴中加热5min,然后用自来水冷却,各加入21.5 ml蒸馏水使总体积为25 ml,摇匀,在520nm波长处测定吸光度(A)值。
2.样品中蔗糖的水解
精确吸取上述测定还原糖含量的糖分提取液10 ml置于100 ml三角瓶中,加6mol·L-1盐酸10 ml,摇匀,在沸水浴中加热10min,冷却后加入酚酞指示剂一滴,以10﹪氢氧化钠中和至溶液呈微红色,然后将提取液转入50 ml容量瓶中加蒸馏水稀释定容至刻度,待测。
3.样品中总还原糖的测定
取4 支25 ml刻度试管,编号,其中3支(三个重复)分别加入待测液2 ml,1支空白管加
2 ml蒸馏水,然后各管再加入DNS试剂1.5 ml,摇匀,混合液在沸水浴中加热5min,然后用自来水冷却,各加入21.5 ml蒸馏水使总体积为25 ml,摇匀,在520nm波长处测定吸光度(A)值。
常见问题
根据待测液的吸光度值从上述标准曲线查中出其相应的还原糖含量,然后按下公式计算出样品中可溶性糖总量和蔗糖总量的百分率。
来源:丁香实验