简介
很多生物和非生物逆境都会诱导过氧化氢 (H2O2) 的产生,日。2 作为信号分子 在植物抗逆过程中起重要作用。因此,对 h2o2 在植物体内变化的了解,可反映出植物体对 逆境胁迫的响应程度。通过本实验可了解 h2o2 含量测定的原理和方法。
原理
过氧化氢含量的测定的基本原理是H2O2与硫酸钛 (或氯化钛) 生成过氧化物-钛复合物黄色沉淀,可被 H2SO4 溶解后,在 415 nm 波长下比色测定。在一定范围内,其颜色深浅与 H2O2 浓度呈线性关系。
材料与仪器
材料:分别取幼嫩和衰老的植物叶片或其他受逆境胁迫的植物组织。
器材:研钵,0.2 mL 移液管 2 支,5 mL 移液管 1 支,10 mL 容量瓶 7 个,5 mL 离心管 8 支,离心机, 分光光度计。
试剂:
①100 μmol・H2O2 溶液:取 30% 分析纯 H2O2 57 μL, 溶于 100 mL, 再稀释 100 倍
②2 mol ・ L-l 硫酸溶液
③5%(W/V) 硫酸钛溶液
④丙酮
⑤浓氨水
步骤
试剂 | 离心管号 | ||||||
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | |
100 〃mol ・ L_1 H2O2 溶液 | 0 | 0.1 | 0.2 | 0.4 | 0.6 | 0.8 | 1.0 |
4°C 下预冷丙酮 | 1.0 | 0.9 | 0.8 | 0.6 | 0.4 | 0.2 | 0 |
5% 硫酸钛溶液 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 |
浓氨水 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
3 000 rmin-1 离心 10 min, 弃去上清液,留沉淀 | |||||||
2 mol - Li 硫酸溶液 | 5.0 | 5.0 | 5.0 | 5.0 | 5.0 | 5.0 | 5.0 |
注意事项
H2O2 溶液在放置过程中会自行分解,因此久置的H2O2溶液临用前要经过重新标定。
来源:丁香实验