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腹泻病毒的直接检测

相关实验:腹泻病毒及其检验

最新修订时间:

简介

有几种不同的检测方法可以被用来直接检测临床标本中的腹泻病毒,包括电子显微镜法、抗原检测法和核酸检测法。根据检测条件、当地人员的专业背景和实验室设施不同,这些不同检测方法在不同诊断实验室中使用范围不同。

材料与仪器

器材:
①一次性无菌手套
②标本采集管
③电子显微镜、PCR仪
④培


试剂:
①材料:待采标本
②PBS缓冲液
③培养基

步骤

腹泻病毒的直接检测基本方法有如下几种:


1.电子显微镜法 电镜的敏感度可以通过使用高价免疫血清聚集病毒来提高(即免疫电镜),但是即使采用了这种改良的方法,检测的敏感度也仅限于大约每毫升10~106个病毒颗粒。据报道,电镜检查仅在不超过50% 的急性诺如病毒感染患者中呈阳性,对于轮状病毒的检测敏感性不如酶免疫实验(EIA)。


2.抗原检测 对每种腹泻病毒都有已经上市的抗原检测试剂。使用的检测方法有多种,包括固相EIA,免疫色谱法和乳胶凝聚试验。固相EIA可以在临床实验室进行,通常在2个小时内出结果。免疫色谱法和乳胶凝聚试验简单易行,不到30分钟就可以出结果,但是在有些报告中,乳胶凝聚试验的敏感性(70% ~90% )低于其他检测方法(>90% )。


3.核酸的检测 最常用的是PCR法,但是对于RNA病毒,核酸序列依赖性扩增技术(NASBA)也有使用。在核酸扩增中,粪便标本中经常存在抑制PCR反应体系中酶的活性的物质,妨碍病毒核酸的检测。将粪便稀释成10% 的悬液后,将标本加热至95 ℃,从病毒衣壳中释放出核酸;使用这种方法时,加热后必须立即对样本进行检测,以避免时间过长导致核酸降解。

另一种方法是使用变性剂,例如硫氰酸胍,该方法需要额外的操作步骤,但是核酸提取物不易在分析前快速降解。现在有许多商品化试剂盒可以从粪便标本中有效地提取病毒核酸。还可以向提取的标本中加入一种内控品对照核酸,这是一种能识别是否存在抑制物的常用方法。

来源:丁香实验

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