腹泻病毒的直接检测

有几种不同的检测方法可以被用来直接检测临床标本中的腹泻病毒，包括电子显微镜法、抗原检测法和核酸检测法。根据检测条件、当地人员的专业背景和实验室设施不同，这些不同检测方法在不同诊断实验室中使用范围不同。

器材：
①一次性无菌手套
②标本采集管
③电子显微镜、PCR仪
④培

试剂：
①材料：待采标本
②PBS缓冲液
③培养基

腹泻病毒的直接检测基本方法有如下几种：

1．电子显微镜法 电镜的敏感度可以通过使用高价免疫血清聚集病毒来提高（即免疫电镜），但是即使采用了这种改良的方法，检测的敏感度也仅限于大约每毫升10～10⁶个病毒颗粒。据报道，电镜检查仅在不超过50％ 的急性诺如病毒感染患者中呈阳性，对于轮状病毒的检测敏感性不如酶免疫实验（EIA）。

2．抗原检测 对每种腹泻病毒都有已经上市的抗原检测试剂。使用的检测方法有多种，包括固相EIA，免疫色谱法和乳胶凝聚试验。固相EIA可以在临床实验室进行，通常在2个小时内出结果。免疫色谱法和乳胶凝聚试验简单易行，不到30分钟就可以出结果，但是在有些报告中，乳胶凝聚试验的敏感性（70％ ～90％ ）低于其他检测方法（＞90％ ）。

3．核酸的检测 最常用的是PCR法，但是对于RNA病毒，核酸序列依赖性扩增技术（NASBA）也有使用。在核酸扩增中，粪便标本中经常存在抑制PCR反应体系中酶的活性的物质，妨碍病毒核酸的检测。将粪便稀释成10％ 的悬液后，将标本加热至95 ℃，从病毒衣壳中释放出核酸；使用这种方法时，加热后必须立即对样本进行检测，以避免时间过长导致核酸降解。

另一种方法是使用变性剂，例如硫氰酸胍，该方法需要额外的操作步骤，但是核酸提取物不易在分析前快速降解。现在有许多商品化试剂盒可以从粪便标本中有效地提取病毒核酸。还可以向提取的标本中加入一种内控品对照核酸，这是一种能识别是否存在抑制物的常用方法。