微流控 PCR

微流控 PCR（micro flow-through PCR）是 Martin 等人在 1998 年发明的一种新的流动扩增 DNA 的技术孔 作为第三代 PCR 技术，它的反应体系更小、所需时间更短，而扩增效率并不亚于常规 PCR 和微室 PCR（micro chamber PCR）0 在昂贵稀少样本的检测中有广泛的应用。

微流控 PCR 芯片的实验原理是在其芯片中有 A、B、C 三个恒温区，分别用于 PCR 的变性、复性和延伸，三个恒温区之间有绝缘材料防止热扩散。在芯片上蚀刻微通道，PCR 反应液和不混溶的载液在微通道中连续流动，顺次循环通过这三个恒温区完成扩增反应。微通道的蚀刻模式决定了反应液通过各温度区的时间比以及循环数，微通道的长度以及样品的流速决定了反应时间的长短。两个参数（U 和 D）用于描述样品和试剂的温度均一性和偏差。反应结束在出口收 集反应液，电泳检测扩增效率，或在反应液中加入荧光染料，以光度计直接检测。

微流控 PCR 除了可以处理 DNA 样品之外，还可以对 RNA 样品进行反转录 PCR。因此，微流控 PCR 可广泛应用于病毒感染的 快速分子检测、毒物筛查等。如不对称螺旋管芯片的发明者 Hartung 等人就釆用微流控 RT- PCR 检测感染 HPV（人乳头瘤病毒）的 SiHa 细胞，结果发现灵敏度很高，阳性细胞的浓度低至每微升 5 个细胞时都可以检测到病毒的 mRNA。

器材：

加样注射泵；扩增柱（不对称螺旋管芯片）；Teflon FEP 连接管。

试剂：

模板 DNA； dNTPs（各 10 mmol/L）； PCR 缓冲液（10X）；引物；BSA； MgCl₂ ； T 纣聚合 酶；SYBR green（1 : 10000 稀释）（结果以光度计检测时加入）；水；载液。