狼疮样肾炎动物模型

系统性红斑狼疮 (SLE) 是针对一系列自身抗原形成自身抗休为主要特点的一种自身免疫性疾病，80%~100% 可累及肾脏，称之为狼疮性肾炎 (lupus nephritis ,LN)。目前对于狼疮性肾炎的发病机制尚未完全清楚，其中主要障碍是缺乏一个较典型的动物模型。

目前广泛使用的动物模型有鼠自发性狼疮模型如 NZB/NZW .MLR 等。本文介绍一种狼疮样肾炎动物模型 ( animal models of lupus nephritis) 一慢性移植物抗宿主病 ( c-hronic graft-versus-host diseatse , eGVHD) 鼠模型的建立方法。

实验对象：

① 8~10 周龄雌性（C₅₇BL6 x DBA/2）F1 代杂交鼠 36 只，体重 15~20 g；

② 6~8 周龄雌性 DBA/2 共 150 只，体重 10~15 g。

实验试剂：

① 2.5% 戊二醛。

A. 将 F1 代杂交鼠随机分为 2 组：正常对照和模型组。在无菌条件下，取出脾脏，淋巴结（肠系膜. 腹股沟和颈部）和胸腺， 剪碎，玻片研磨，PBS 冲洗过筛，制成细胞悬液，按 1:1 比例沿离心管壁缓缓加入鼠淋巴细胞分离液，以 1800 r/min 离心 20 分钟，取出淋巴细胞层，用 PRS 稀释洗涤 3 次 (第一次以 1800 r/min 离心 10 分钟，后两次均为 1800 r/min 离心 5 分钟)，最后用 PBS 制备成适量，混匀的淋巴细胞悬液。细胞活力用台盼蓝拒染试验和位相显微镜观察测定，活细胞至少 90% 以上。细胞总数用流式细胞仪测定。模型组于第0、3、7 和 10 天，进行受体鼠尾静脉注射淋巴细胞悬液，每次注射 0.25 mL，含 50 x 10G 个受体活细胞。对照组每次等量的 PBS。

B. 动物放在代谢笼中喂养，自由进水和食物 18 小时，收集上午 8 时至次日上午 8 时代谢笼中尿 (1~3 mL/d)。于第一次注射后 2 周始，以后每间隔 2 周时间，测定模型鼠 24 小时尿清蛋白排泄量（采用放免测定法）经眶丛用玻璃毛细吸管采血 0.5 mL，制备血清，分装 -20 ℃ 贮存，用 ELISA 方法测定抗 ds-DNA 抗体, 并观察鼠有无皮下水肿、腹水, 体重变化及寿命。

C. 为了解肾脏病变进程的形态学变化，于第 4 次注射后 4、8 和 12 周，随机取对照组和模型组鼠各 1 只，短颈处死，取出肾脏，制备石蜡组织切片和冷冻切片。石蜡切片分别行 HE、PAS、PASM 和 Masson 染色；冷冻切片行直接免疫荧光分析肾组织 IgG 沉积。于 12 周随机取模型组鼠 1 只，制备电镜标本，用 2.5% 戊二醛固定，经常规包埋、脱水、切片、染色后用电镜观察分析。