皮下植入试验

器材：

手术剪、组织剪、止血钳、拉钩、巾钳、平镊、齿镊、手术刀柄、戊巴比妥钠、洞巾、缝针、一次性口罩帽子、碘伏、医用纱布、2 ml 注射器、5 ml 注射器若干、医用橡胶手套。

试剂：

① 生理盐水;

② 青霉素;

③ 戊巴比妥钠。

皮下植入试验的基本过程可分为如下几步，以实验大鼠为例：

A 使用健康大鼠 20 只左右，其中每一植入时期 3～4 只。试验前使动物最少适应环境 5 天。

B 戊巴比妥钠腹腔注射麻醉大鼠，剂量为 40 mg/kg，麻药配制质量比浓度一般为 1%。麻醉时应注意实验动物的保温，防止因温度过低导致动物死亡。将实验动物在手术台上固定，除去脊柱两侧被毛，常规消毒去毛区皮肤，手术区域约 4 cmx4 cm。按植入要求，在动物脊柱两侧每一植入位点作一皮肤切口，长约 1 cm，单侧点间距离至少 1 cm。钝性分离皮下组织，深至浅筋膜肌层，每只动物每一侧作 2～3 个皮下囊（图 10-5-12）。一侧植入试验物，另一侧植入对照物 3 个。关闭切口并分层缝合皮下组织和皮肤。碘伏消毒伤口。试验周期为 2 周、4 周和 12 周。样品及对照材料植入部位如图 10-5-13 所示。

分别在植入后 2 周、4 周和 12 周后取样，每一时期各取 3～4 只大鼠，无痛处死后，沿脊柱中线切开皮肤，仔细分离皮下组织，使植入材料位于皮肤上，切取试验材料及其周围组织（图 10-5-14）。置 10%～20% 甲醛溶液内固定 1 周后，陶瓷类样品置有机酸和无机酸混合脱钙液中脱钙，脱钙期间，用小的针头轻刺样品所在部位，判断陶瓷样品的脱钙程度，直至较硬的钙组织全部脱去后以梯度乙醇脱水，石蜡包埋，切片，HE 染色。非陶瓷类较硬的样品如纯钛需将样品小心地取出后（防止样品与组织界面遭到破坏），将样品所在处的皮肤组织脱水包埋、切片处理。部分较软的组织工程支架类样品无需脱钙处理，可在固定后直接进行脱水包埋切片处理。

A 肉眼观察。实验动物一般状态观察，记录体重增长情况等。试验与对照样品植入后，观察各时期动物的创口有无发红、水肿或出血，以及创口愈合情况等。

B 显微镜观察。观察的生物反应观察指标见表 10-5-5，表 10 - 5-6，数据处理方法见表 10-5-7。包括：纤维化/纤维囊腔和炎症程度；由组织形态学改变而确定的变性；材料/组织界面炎症细胞类型，即中性粒细胞、淋巴细胞、浆细胞、嗜酸性粒细胞、巨噬细胞及其他多核细胞的数量和分布；根据核碎片和（或）毛细血管壁的破裂情况确定是否存在坏死；其他指标，如材料碎片、脂肪浸润、肉芽肿等。

C 各植入时期每张切片分别观察，然后对每一植入时期的切片进行综合分析。综合考虑各时期组织反应的变化情况后，一般以最长时期的切片观察结果来判断样品植入的组织反应程度，皮下植入后组织切片观察参见示例图 10-5-15，图 10-5-16。