移植瘤动物模型的建立

移植瘤动物模型的建立一般选用自发瘤或诱发瘤组织块在无菌条件下放入组织碾磨皿内制成瘤细胞悬液，或培养细胞悬移植入同种/系大鼠或小鼠体内。对于腹水型肿瘤，其接种于腹腔。

器材：

瘤块、无菌套管针、注射器、离心机等

试剂：

①无菌生理盐水；

②胰蛋白酶；

③PBS；

移植瘤动物模型的建立根据类型分为实体瘤与腹水型两类，具体步骤如下：

（一）实体瘤造模：

A、肿瘤组织块接种法：选取接种后 7-10 天、生长状态良好的瘤源动物，处死后，消毒接种部位皮肤，切开皮肤，刺离出接种的瘤块，选取生存良好而无坏死的瘤组织，在装有灭菌 PBS 放置于冰块上的平皿内将瘤组织剪成 2 mm² 的小块。用无菌套管针抽吸瘤块，接种于同种受体动物腋窝皮下。

B、瘤细胞悬液接种法：无菌取出瘤块，将瘤块尽可能剪成小块，在无菌玻璃匀浆器中加无菌生理盐水朝一个方向研磨，经滤网过滤后，加生理盐水稀释成瘤细胞悬液 (1：3-1：5)，台盼蓝染色计数活细胞数，用 1 mL 注射器接种 0.2 mL 瘤细胞液 (含 1×106-1×107 个细胞)。

C、培养细胞接种法：将对数生长期瘤细胞用 0.25% 胰蛋白酶消化脱壁后, 用 PBS 以 1000 r/min 离心 10 分钟，洗涤 2 次，洗掉细胞中的胰蛋白酶和培养基中的血清等成分，台盼蓝染色计数活细胞数，用 PBS 将肿瘤制成一定浓度的细胞悬液。用 1 ml 注射器接种 0.2 mL 瘤细胞液 (含 1×106-1×107 个细胞)。

D、种原位移植：以 C6 细胞，Wistar 大鼠为例：用 1% 戊巴比妥钠 (60 mg/kg) 腹腔注射麻醉大鼠后，将大鼠头部固定在脑立体定向仪上剪去头顶部毛发，碘酒、乙醇消毒后铺洞巾。内眦连线与头部正中矢状面交点向后纵向切开头皮约 l cm，分离暴露颅骨。在立体定位仪引导下、根据 Batker 法确定石尾状核靶点，于冠状缝后 1 mm，中线右旁开 3 mm. 用牙科钻钻一小孔，勿损伤硬脑膜。25μl 微量注射器抽取 C6 细胞悬液 10 μl(1×106 C6 细胞)，沿骨孔缓慢重直进针至硬脑膜下 6 mm，再回退 1 mm(距硬脑膜下 5 mm)。注射速度为 1 μl/ min，共注射 10 分钟. 注射完毕后留针 5 分钟、缓慢拔针。骨孔用牙托粉封闭。生理盐水冲洗手术野，4 号线缝合切口后消毒皮肤。整个接种过程在层流超净工作台进行，术后无需抗感染治疗，单笼饲养。

（二）腹水型造模：

A、选取接种后 5-7 天、生长状态良好的瘤源动物，处死后，仰卧位固定，消毒腹部皮肤，剪开腹部皮肤，用无菌注射器刺入腹腔抽取腹水，抽出的腹水以乳白色黏稠液体为佳，若为黄色或含有大量红细胞应弃去。