简介
过氧化物酶是肝、肾、中性粒细胞及小肠黏膜上皮细胞中存在丰富的酶类,较多存在于细胞的过氧化物酶体中,参与细胞中的各种氧化反应,可将各种底物氧化。
原理
细胞中过氧化物酶显示实验的基本原理是过氧化物酶是肝、肾、中性粒细胞及小肠黏膜上皮细胞中存在丰富的酶类,较多存在于细胞的过氧化物酶体中,参与细胞中的各种氧化反应,可将各种底物氧化。本实验利用过氧化物酶的上述性质,将底物 H2O2 分解,产生新态氧,使无色联苯胺氧化成蓝色联苯胺蓝,进而变成棕色产物,可根据颜色反应来判定过氧化物酶的有无或多少。
材料与仪器
器材:
染色缸、载玻片、盖片、吸管、注射器、吸水滤纸、解剖器材、蜡盘、普通光学显微镜、小白鼠。
试剂:
①联苯胺混合液(联苯胺(4,4-diamino benzidine)0.2 g ,95%乙醇100 mL ,3%过氧化氢,2 滴 。此液临用时配制);
②0.5%硫酸铜;
③1%番红
④中性树胶
步骤
细胞中过氧化物酶显示实验的基本过程可分为如下几步:
A.取小白鼠1 只 ,以颈椎脱位法将其处死,迅速剖开后肢暴露股骨,将股骨从一端剪断,用注射器吸出骨髓滴到载玻片一端(必要时可滴加1 滴 PBS 进行稀释)。
B.推片,室温晾干。
C.将涂片浸入0.5%硫酸铜中30 s 。
D.浸入联苯胺混合液中反应6 min 。
E.流水冲洗,浸入1%番红溶液中复染2 min 。
F.流水冲洗,室温晾干。
G.镜检或滴1 滴 中性树胶,加盖盖片进行封片观察。
注意事项
1.本实验中联苯胺混合液在空气中极易被氧化而呈现棕色,降低染色效果,因此,该溶液应用时现配,在操作过程中也应注意减少与空气接触。
来源:丁香实验