简介
密度梯度离心法分离细胞组分是将差速离心分离得到的沉淀物进行密度梯度离心，即将梯度介质从离心管底到管口制成几级不同的浓度的区带，当形状、大小和密度不同的细胞成分加入管面，经超速离心后，就会集中于不同的区带，可从不同的区带中分别收集到纯度很高的细胞器或细胞组分。
原理
密度梯度离心法分离细胞组分的基本原理是细胞内的各种成分密度不一样，在同一离心场内的沉降速度也不同，为了得到较纯的细胞组分，将差速离心分离得到的沉淀物进行密度梯度离心，即将梯度介质从离心管底到管口制成几级不同的浓度的区带，当形状、大小和密度不同的细胞成分加入管面，经超速离心后，就会集中于不同的区带，可从不同的区带中分别收集到纯度很高的细胞器或细胞组分。
材料与仪器
器材：
玻璃匀浆器、低温离心机、天平、离心管（Eppendorf 管）、鼠肝。
试剂：
① 0.25 mol/L 的蔗糖溶液
② 0.34 mol/L 的蔗糖溶液
③ 0.5 mol/L 的蔗糖溶液
④ 1.2 mol/L 的蔗糖溶液
⑤ 1.23 mol/L 的蔗糖溶液
⑥ 1.3 mol/L 的蔗糖溶液
⑦ 2.0 mol/L 的蔗糖溶液
步骤
密度梯度离心法分离细胞组分的基本过程可分为如下几步：
（一）组织匀浆制备
A 取材 将空腹 12 h 的大鼠拉颈处死。剖开腹部，迅速取出肝脏，用生理盐水洗净血污，滤纸吸干。
B 制备匀浆 称取约 2 g 左右的肝组织，用预冷的 0.25 mol/L 的蔗糖溶液冲洗数次，再剪碎。以预冷的 0.25 mol/L 的蔗糖溶液悬浮剪碎的组织（9 ml/g），倒入匀浆器内，在冰浴条件下匀浆。匀浆完成后，用双层尼龙布过滤，即制得肝细胞匀浆，备用。
（二）密度梯度离心法分离细胞器
A 细胞核的分离 组织匀浆 2000 g 离心 15 min；将分离所得沉淀以适量的 0.25 mol/L 的蔗糖溶液悬浮；离心管内铺制梯度液，2.0 mol/L 和 1.3 mol/L 的蔗糖溶液各 4 mm，将细胞核悬液铺于离心管液面上，100000 g 离心 30 min，取沉淀，即得细胞核。
B 线粒体和溶酶体的分离 将获取细胞核后所得的上清液以 15000 g 离心 25 min，取沉淀，以 0.25 mol/L 的蔗糖溶液悬浮；离心管内铺制梯度液，从上至下分别铺制 0.5 mol/L、1.2 mol/L 和 1.3 mol/L 的蔗糖溶液各 2 mm，将悬浮液加入离心管内，100000 g 离心 3 h，在 0.5 mol/L 与 1.2 mol/L 的界面处可得线粒体，在 1.2 mol/L 和 1.3 mol/L 的蔗糖溶液界面处可得溶酶体。
C 质膜、高尔基体和微粒体的分离 将步骤（2）中 100000 g 离心 3 h 后所得沉淀以蔗糖缓冲液悬浮；离心管内从上至下铺制 1.0 mol/L 和 2.0 mol/L 的蔗糖梯度液，将悬浮液加入管内液面上，200000 g 离心 6 h，可在 1.0 mol/L 和 2.0 mol/L 蔗糖梯度液交界面提取到高尔基体，在 2.0 mol/L 蔗糖溶液中提取到微粒体，在 1.0 mol/L 蔗糖溶液中提取到质膜。
注意事项
铺制梯度液时要轻轻地将蔗糖溶液铺于管内的液面上，应见到明显的界面，否则会影响分离效果。
来源：丁香实验
