实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)模型

(1)免疫原的制备人工合成加利福尼亚电幔AchR-a的146-162序列片段作为免疫原，其氨基酸序列为Ala-Ile-Phe-Lys-Ser-Tyr-Cys-Glu-Ile-Ile-Val-Thr-His-Phe-Pro-Phe-Asp。

(2)模型制备程序为：①将合成多肽20µg溶解于100µL的PBS缓冲液中(pH7.2),并加入等量的CFA,充分混合，直到水溶液完全被油滴吸附；②皮下注射接种于背部6处（每处20µL)、两后肢垫（每处20µL)和尾基部(40µL); ③将合成多肽20µg溶解于50µL的PBS缓冲液中(pH7.2)，并加入等量的不完全弗氏佐剂，充分混合；④混合注射于背部3处（每处20µL)和尾基部(40µL)。;

结果判定：对于实验性自身免疫性重症肌无力动物模型来讲，单纯的症状如体重下降，活动、进食减少、闭目等并无特异性。血清抗体检查存在抗体阴性和检出率的问题。动物电生理的检查，存在一些干扰因素，不能排除误差。因此必须综合多个指标进行分析，其中症状、AchR-Ab抗体滴度和电镜结果最有意义。

(1)临床症状按照Lennon分级法将症状严重程度分为：

①0级没有肯定的无力表现；②1级撕咬无力，四肢力量较差，在光滑地面上前肢打滑，活动减少且易疲劳；③2级明显无力，休息时身体呈隆起姿势，头尾下垂，大腿外展，前肢（趾）弯曲，动作笨拙，步态不稳；④3级严重无力表现，无撕咬动作，肌肉震颤，呼吸困难，濒死或死亡。症状居于中间者，分别评为0.5、1.5和2.5级。每天按照以上标准观察并记录症状变化。

(2)电生理检查用水合氯醛溶液将小鼠麻醉后固定在木板上，将成对刺激电极以2-3mm距离插至坐骨切迹附近肌肉内，记录电极置于胖肠肌内侧头（跟腿附着处），重复用50-100Hz电刺激，并记录小鼠排肠肌电位及收缩波幅。成功模型可见重复神经电刺激呈衰减反应。

(3)电镜检查通常将小鼠断颈法处死，在解剖显微镜下沿坐骨神经分离组织，于腓肠肌终末分支处迅速取其排肠肌组织进行透射电镜观察。成功模型大鼠神经肌肉接头褶局部紊乱、溶解、消失，突触前膜囊泡减少，线粒体等细胞器空泡化。

(4)AChR-Ab滴度检测免疫后7周经颈动脉采血分离血清，采用ELISA测定AChR-Ab含量。按公式：P/N=待测血清D（λ）490nm/正常组D(h)490nm计算。以P/N值≥2.l为阳性，≤1.4为阴性，介于两者之间为可疑阳性

(1)动物选择大鼠、小讯、豚鼠、家兔及猴均可诱导产生EAMG,但是不同种属动物易感性不同。目前最常用到的实验动物为大鼠和小鼠，且大鼠EAMG模型和人类更为接近。大鼠近交品系对该模型的易感性依次为Wistar > munich > fischer > Lewis > Buffalo > Brown > Norway > ACI > Wistar Kyoto > Kopen-hagen > Wistar Furth,因此最常使用Wister大鼠作为实验对象。随着转基因小鼠的普遍使用，小鼠EAMG模型也逐渐受到重视，目前发现，C57BV6、SJL和AKP易感性较高，而SWR、BALB/c和C3H/He易感性较低。

(2)抗原的种类、选择和制备传统方法采用加利福尼亚电鳗电器官分离乙酰胆碱受体(AchR)免疫大鼠建立EAMG模型。随着基因克隆技术的发展和人类对乙酰胆碱受体亚基及其氨基酸序列的深入研究，可以通过人工合成加利福尼亚电绶的AchR-o146-162序列片段作为免疫原，其氨基酸序列为：Ala-Ile-Phe-Lys-Ser-Tyr-Cys-Glu-Ile-Ile-Val-Thr-His-Phe-Pro-Phe-Asp。此外，Angela等用人类AChR-a的138-167、157-188、185-199、309-345和338-368片段作为免疫原对兔进行动物模型的制备，结果证明AChR-0138-167片段的成功率最高。