​实验性自身免疫性神经炎(EAN)模型

(1) 周围神经髓鞘的制备自牛脊神经根提取周围神经髓磷脂(bovine peripheral mylin,BPM):

①取牛硬脊膜内神经根，-70℃冻存；②室温融溶，剪碎，与0.3M蔗糖溶液混合，使用组织高速离散器制成5%(w/v)组织匀浆；③离心管中加入0.5M蔗糖溶液，再加入0.3M蔗糖组织匀浆（比例1:1),96000g,离心60min; ④收获界面（乳白色中间层），加入蒸馏水悬浮，96000g,离心20min; ⑤取沉淀，对蒸馏水4L透析24h; ①～⑤步骤均在4℃操作。⑥-70℃冻干，-20℃保存备用。

(2)模型制备方法包括：①第一次免疫(Od)异氟醚吸入麻醉下，背部四个不同位置进行皮下注射，剂最为50µL的完全乳化液(200µg PO106-125+25µL盐水和0.5mg结核分枝杆菌＋25µL弗氏不完全佐剂）；②第二次免疫(7d) 异氟醚吸入麻醉下，背部4个不同位置进行皮下注射，剂釐为50µL的完全乳化液(200µg P0106-125+25µL盐水和0.5mg结核分枝杆菌+25µL弗氏不完全佐剂）。

结果判定：成功模型主要表现为动物体重不增，运动迟缓，先后出现两后肢无力、瘫痪，严重者累及前肢，甚至呼吸困难、死亡。

(1)临床评分分为：①0正常；②0.5全尾肌张力下降；③1.0尾部肌肉瘫，松软拖地；④1.5轻微后肢无力，肌张力下降；⑤2.0明显后肢无力或轻度后肢瘫；⑥2.5中度后肢瘫；⑦3.0严重后肢瘫；⑧4严重四肢瘫。

(2)取材Lewis大鼠10%水合氯醛腹腔麻醉后，左侧臀部剪毛、消毒，分离出坐骨神经，剪取靠近脊柱侧坐骨神经长约1cm,4%甲醛固定，纵向包埋，常规石蜡切片。

(3)染色与观察苏木精－伊红染色观察Lewis大鼠坐骨神经组织切片淋巴细胞、巨噬细胞等炎性细胞的浸润情况；固绿髓鞘染色法观察Lewis大鼠坐骨神经组织切片髓鞘脱失程度

(1)动物选择Lewis大鼠、SJL小鼠、豚鼠、兔、猴、羊均可作为敏感动物来诱导EAN,其中豚鼠和SJL小鼠的使用最为广泛。

(2)抗原的种类、选择和制备近年来在研究诱导EAN的免疫原方面有了很大进展，从最初用周围神经组织匀浆诱导EAN逐步发展用周围神经系统的髓鞘P2蛋白、P2蛋白特异性T细胞株、P2中提取的肽段及人工合成肽段作为EAN的免疫原。MBP包括PO、Pl、P2,PO不具有免疫原性，Pl存在于中枢及周围神经中，用Pl蛋白加上完全佐剂免疫动物可诱发EAE和EAN,P2只存在于周围神经中，用P2加上完全佐剂免疫动物只会产生EAN,不产生EAE。最主要的模型是采用敏感鼠种Lewis大鼠。可用纯化的周围神经髓磷脂，牛的P2蛋白，重组人的P2蛋白或P2蛋白肽53-78主动诱导。SJL小鼠可有中度临床症状和组织学损害，Balb/c小鼠对该模型相对抵抗。