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实验性X综合征大鼠模型的建立

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2325

1988年Reaven提出X综合征,目前多称“代谢综合征”,也称“胰岛素抵抗综合征”(Syndrom of insulin resistance,SIR),它不等同于胰岛素抵抗(insulin resistance,IR),而是一组临床和实验室的征候群,其主要表现为:IR、高血压、高胰岛素血症及脂质代谢紊乱,其核心问题是IR。该病的发生既有遗传因素,也有环境因素共同作用的可能。

流行病学研究调查提示:高糖饮食是致胰岛素抵抗和糖尿病发病的高度危险因素,高果糖最易造成IR。近年来临床医师发现原发性高血压病人常伴随糖、胰岛素和脂蛋白代谢异常,而继发性高血压病人中无此现象。

现有的研究资料仅对IR或糖尿病动物模型报道较多,但有关典型X综合症动物模型报道甚少且成功率和重复率低。为此,我们经反复探索,找到了一种成功率高、重复性好的造模方法:即利用两肾一夹(two-kidney,one-clipped:2K1C)加高果糖喂养SD大鼠建立X综合症动物模型,为X综合症的实验研究提供了一种理想的动物模型。

1、材料和方法

1.1 实验动物和分组 清洁级雄性SD大鼠20只,体重(200±20)g。大鼠随机分成两组:对照组9只,普通饲料喂养8周;肾性高血压+高果糖组11只,即模型组。

1.2 主要仪器和试剂 鼠尾动脉测压仪(HX-1型);HITACH 717全自动生化分析仪;全自动放射免疫γ计数仪;D果糖购于上海生工生物工程有限公司;胰岛素检测试剂盒。

1.3 模型制备方法 清洁级雄性SD大鼠20只,普通饲料喂养1周后,于清醒状态下(上午10~12h)用尾套法(尾动脉血压计与心电图机相连)测大鼠的收缩压(systolic blood pressure,SBP)。

术前禁食过夜,自由饮水,用4%戊巴比妥钠(40mg/kg)腹腔麻醉,无菌状态下,分离左肾动脉,用一间隙为0.25mm的U型银夹使左肾动脉部分狭窄,右肾及动脉不触及,制造2K1C大鼠模型。

对照组大鼠施以假手术,除不结扎肾动脉外,其他操作相同。术后大鼠普通饲料喂养,术后约3d动物恢复正常,之后每周末按前述方法测收缩压。术后4周筛选出SBP>140mmHg的大鼠,改用高果糖饲料喂养4周。

高果糖饲料中三大能量物质按热卡计算:糖占75%,脂肪占12%,蛋白质占13%;普通饲料中糖占60%,脂肪占11%,蛋白质占29%。

1.4 糖耐量实验 在8周末,大鼠空腹过夜,第二天早晨,从尾动脉采血0.4ml作对照血样本,之后按2g/(kg·w)的剂量给每只大鼠腹腔注射50%的葡萄糖,15、30、60、90 min后,分别从各实验组大鼠尾动脉采集血液0.4ml,立即离心,置-4℃冰箱,用于分析血糖,血胰岛素。血糖、血胰岛素的测定分别采用葡萄糖氧化酶化法和放射免疫法。

1.5 空腹血糖、血脂的测定 术后第8周作空腹血糖、血脂的测定。实验前禁食、禁水12h,按40mg/(kg·w)以4%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉大鼠,开胸暴露心脏,用12号针头直接从心脏采血测定以下指标:

①空腹血糖(Fasting Blood Sugar,FBS):采用葡萄糖氧化酶化法。

②血脂(甘油三酯Triglyceride,TG;总胆固醇total cholesterol,TC;低密度脂蛋白胆固醇low density lipoprotein cholesterol,LDLC;高密度脂蛋白胆固醇high density lipoprotein cholesterol,HDLC ):采用酶法。以上各项指标均由HITACH 717全自动生化分析仪测定。

③空腹血清胰岛素(Fasting Serum Insulin,FSI):采用放射免疫法测定,按试剂盒要求测定并计算胰岛素敏感指数(Insulin Sensitive Index,ISI)。

1.6 统计学分析 所有结果用SPSS10.0处理。组间比较采用非配对t检验,P<0.05为有显著性差别。

2、结果

2.1 血压的变化 对照组收缩压变化不明显,模型组术后收缩压开始升高,于术后第3周达到一拐点,之后2周血压较平稳,大约在第6周开始血压又开始有上升趋势。

2.2 糖耐量实验 8周后,模型组无论在基础状态还是腹腔注射葡萄糖后15、30、60、90 min,血糖、血胰岛素均较对照组高,在30min时两组血糖和血胰岛素均达到高峰。

2.3 空腹血糖、血脂的变化 与对照组相比,术后第8周模型组FBS、FSI、TG、TC、LDLC显著增加,而HDLC、ISI显著降低。

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