原理
酪蛋白的敏感性鉴定可以通过这个实验得到很大程度的改善。含氮的基团与酪蛋白的共价键被蛋白水解时切断,用 TCA 上清液测定它们的颜色变化。
材料与仪器
蛋白酶溶液
磷酸钾 偶氮酪蛋白(磺胺偶氮酪蛋白) 三氯乙酸
分光光度计
磷酸钾 偶氮酪蛋白(磺胺偶氮酪蛋白) 三氯乙酸
分光光度计
步骤
0.5 ml 偶氮酪蛋白溶液
0.2 ml 蛋白酶溶液
25℃ 时培养 30 min 后,加 0.2 ml 10% 三氯乙酸停止反应,离心 5 min。
于 340 nm 处测上清液的吸收值,1U 是指 1 h 内,能使吸收值变化 1 的酶量。
常见问题
试剂:
0.1 mol/L 磷酸钾,pH 8.0
0.2% 偶氮酪蛋白(磺胺偶氮酪蛋白)溶于 0.1 mol/L 磷酸钾溶液,pH 8.0
10% 三氯乙酸(TCA,质量浓度)
来源:丁香实验