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改进的石蜡切片 DNA 提取方法

相关实验:用于 PCR 的模板 DNA 制备实验

最新修订时间:

原理

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材料与仪器

步骤

1. 5 μm 厚的石蜡切片 5 至 10 张贴在干净的载玻片上,常规烘片,脱蜡,水化,蒸馏水清洗,无菌蒸馏水浸泡,取出晾至半干。


2. 无菌尖头刀片刮下,放入 300~900 μl 组织裂解液中,并加入 20 mg/ml 蛋白酶 K(PK)10~15 μl,封口膜封口,置 55℃ 3 h 以上。


3. 其间用指轻弹离心管以利裂解。若有沉淀,再加入 5~10 μl 蛋白酶 K,直至无沉淀已澄清为止。


4. 灭活蛋白酶 K 裂解液中含有蛋白酶 K,需放入沸水中 10 min 以灭活蛋白酶 K。


5. 沉淀蛋白质按裂解液量的 1/3 加入蛋白质沉淀液(饱和乙酸钠)并混匀,14500r/mm 离心 15 min。此时,蛋白质沉于管底,DNA 溶解于上清液中。


6. 析出 DNA 取上清液并加入等量冷异丙醇,充分混匀,新鲜标本此时可见 DNA 丝缠绕成团析出。若新鲜标本童太少或固定组织因 DNA 片段较小,无法用肉眼见到 DNA 成团析出,需 14500 r/min 再离心 10 min,一般 DNA 可见于管底。


7. 洗涤溶解 DNA 倒去上清液,加入适量的 75% 冷乙醇,以洗掉残存的异丙醇和无机盐等物质,反复洗 2 遍。将管底含有 DNA 的离心管倒扣在清洁纸上,以挥发掉残留的乙醇和水。约 30 min 后,在 DNA 尚不太干时加入适量 TE 溶解 DNA。

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注意事项

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常见问题

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来源:丁香实验

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