植物组织中酶的检测方法

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植物组织中酶的组织化学鉴定，其基本原理是以某些物质为基屈，在专一酶的作用下，产生 种有颜色的化合物来表示某种酶的存在。为保持酶的活性，通常要采用冰冻切片法来得到切片，有时也可用徒手切片法。

(1)细胞色素氧化酶：将切片放人磷酸缓冲液 (pH 值 5.8) 中，室温下放置 5-10min, 然后移入巳配备好的 1%α-萘酚和 1%盐酸对氨基二甲胺的等量混合液中，约 5min 后取出，放在载玻片上，加 1滴重蒸馏水，盖上盖玻片后镜检．显示蓝色的部位即有细胞色素氧化酶存在。

(2) 过氧化物酶：将切片先在磷酸缓冲液 (pH 值 7.2) 中浸泡 5min 后，放入 0.1%钼酸铵溶液中于温下浸泡 5 min, 再移入 0.1%联苯胺溶液（联苯胺 0.1g, 蒸馏水 100ml, 加热溶解，冷却后加入 30%的过氧化氢1滴。）中 0.5-1.0 min, 取出放在载玻片上，加蒸馏水 1滴，盖上盖玻片后镜检，显示蓝色部位即有过氧化物酶存在，

(3) 多酚氧化酶：切片先在磷酸缓冲液 (pH 值 7.2) 中放置 5min, 移至 1%邻苯二酚溶液中，在 37'C下保温 3-10 h 后镜检。显荼褐色部位，表示有多酚氧化酶存在。

(4) 腺苷三磷酸酶：将切片在底物（配方： 0.125%ATP 10mL,0.2mol/L 、 pH 值 7.2TrisHCl 缓冲液 10 mL,2%硝酸铅 1.5mL,0.1mol/L 硫酸镁 25mL, 蒸馏水 1mL) 中 37℃下保温1-3h, 蒸馏水漂洗，在 1%硫化胺中显色 1min, 用蒸馏水洗后装片，镜检，呈深棕色或棕黑色处即有腺昔三磷酸酶存在。

(5)脱氢酶：将切片浸在 0.5%TTC 溶液中， 37℃下放置 15min 左右后取出，装片，镜检，有红色反应的部位即有脱氢酶存在。

(6)淀粉酶：先将含 1%淀粉的 1%琼脂胶液趁热涂在载玻片上，冷凝后把植物组织的切片贴在琼脂凝胶上在 30-50℃温室中放置 2h, 再将载玻片放在碘－碘化钾溶液 (0.12%)中染色，贴切片处如不被染成蓝色，则表示组织中有淀粉酶存在。

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