原理
材料与仪器
LDH 稀释溶液
磷酸钾 NADH 丙酮酸
荧光光度计
磷酸钾 NADH 丙酮酸
荧光光度计
步骤
实验所需「试剂」具体见「其他」
1.98 ml 实验混合物
0.02 ml LDH 稀释溶液
25℃ 时,在 260 nm 激发,470 nm 处测定每分钟荧光差异。用适当浓度范围的 NADH 浓度对荧光强度的标准曲线来确定比例因子。
计算
体积活性:
特殊活性:
常见问题
试剂:
0.1 mol/l 磷酸钾 pH 7.0
0.01 mol/l NADH(71 mg 溶于10 ml H2O 中)
0.1mol/l 丙酮酸(丙酮酸钠,Mr=110;110 mg溶于10 ml H2O 中)。
LDH 原料溶液(从猪心脏提取,例如 10 mg/ml,用 0.1 mol/l 磷酸钾 pH 7.0 稀释至 1 IU/ml)
来源:丁香实验