L-乳酸脱氢酶测定实验

实验分类：

生物化学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

本实验主要用于测定L-乳酸脱氢酶的活性。

来源：丁香实验

操作方法

分光光度计法测定还原反应

一、试剂：0.1 mol/l 磷酸钾 pH 7.00.01 mol/l NADH（71 mg 溶于10 ml H2O 中）0.1mol/l 丙酮酸（丙酮酸钠，Mr＝110；110 mg溶于10 ml H2O 中）。LDH 原料溶液（从猪心脏提取，例如 10 mg/ml，用 0.1 mol/l 磷酸钾 pH 7.0 稀释至 1 IU/ml）二、LDH活力测定1. 取1只比色杯中加入0.1 m mol

荧光光度计法测定还原反应

实验所需「试剂」具体见「其他」1.98 ml 实验混合物0.02 ml LDH 稀释溶液25℃ 时，在 260 nm 激发，470 nm 处测定每分钟荧光差异。用适当浓度范围的 NADH 浓度对荧光强度的标准曲线来确定比例因子。计算体积活性：特殊活性：

氧化反应测定

实验所需「试剂」具体见「其他」0.98 ml 实验混合物0.02 ml LDH 稀释溶液25℃ 时，于 340 nm 处吸收值降低。NADPH 的吸收系数 ε340＝6.3×103 l/（mol·cm）。