单病毒感染OST7-1细胞

OST7-1 细胞来源于鼠 L929 细胞，能在细胞质中持续表达噬菌体 T7 RNA 聚合酶，因此，应用此细胞系无需用 vTF7-3 感染细胞。

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贴壁培养的单层 OST7-1 细胞 含有 pT7 控制的外源基因的重组病毒储液
完全 MEM-2.5 培养基 完全MEM-10培养基（含有 400 μg ml Geneticin） 胰酶（2 × 结晶无盐 过滤除菌后冻存于 -20℃）
过滤除菌后冻存于 -20℃

1. 用含有 400 μg/ml G418 的完全 MEM-10 培养基以 1 × 10⁶ 个 OST7-1 细胞/孔加入 6 孔组织培养板培养，直至细胞汇片生长（一般过夜）。

含有 G418 的完全 MEM-10 培养基用于维持细胞培养，但 G418 在表达实验中并不需要。

2. 混合等体积的病毒储液（10 pfu/细胞）和 0.25 mg/ml 胰酶，涡旋混匀。温育 30 min，每隔 5～10 min 晃动一次。

3. 将胰酶处理后的病毒用 MEM-2.5 培养基稀释至 2×10⁷ pfu/ml。

4. 用 0.5 ml 的病毒混合液感染 6 孔板中每孔汇片生长的 OST7-1 细胞，温育 1～2 h, 每隔 15～30 min 晃动一次。

5. 每孔加入 1.5 ml 完全 MEM-2.5 培养基，继续培养。

6. 感染 3～24 h 后，分析细胞（见「两种重组痘苗病毒共感染细胞」步骤 1.6 的注解）。

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1. 所有培养都在加湿的 37℃ 5% CO₂ 培养箱中培养，除非有特殊说明。

2. 与活细胞接触的器械和试剂都应该是无菌的，操作也必须无菌。

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