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显微镜直接计数法

相关实验:牛乳中细菌的检查实验

最新修订时间:

材料与仪器

生牛乳 10 ml
10 ul 微量吸液器与吸嘴 载玻片 美蓝染液(Levowitz-Weber 染料)缶 显微镜 水浴锅 试管架 吸水纸

步骤

1. 在白纸上画出 1 cm2 的方块,然后将玻片放在纸上。


2. 用 10 ul 的微量吸液器吸取混匀了的生牛乳样品,放在玻片 1 cm2 区域的中央。


3. 用接种针将牛乳涂匀,并涂满 1 cm2 的范围。


4. 使涂片于空气中慢慢干燥。将铁丝试管架放在沸水浴中,然后置已干燥的涂片于试管架上,用蒸汽热固定 5 min,待干。


5. 浸于美蓝染液缶内染色 2 min。


6. 取出玻片,用吸水纸吸去多余的染料,晾干。


7. 再用水缓缓冲洗,晾干。


8. 油镜下观察细菌数,共数 30~50 个视野。


9. 计算


每毫升的细菌总数=平均每视野的细菌数×500 000


因为:


一般油镜的视野直径为 0.16 mm


一个视野的面积=0.082 × 3.1416=0.02 mm2 ,化成 cm2 ,视野面积=0.02 × 0.01=0.0002 cm2 ,1 cm2 的视野数=1.0 ÷ 0.0002=5000


又因每 1 cm2 的牛乳量为 0.01 ml,即 1/100 ml,


则每一视野的牛乳量=1/100×1/5 000=1/500 000 ml


所以,一个视野中的 1 个细菌就代表 1 ml 牛乳中有 500 000 个细菌。因此 1 ml 牛乳中的细菌数=一个视野的细菌数×500 000= 50 个视野的细菌数 ÷ 50×500 000

来源:丁香实验

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