免疫电泳实验（免疫电泳实验）

免疫电泳的基本原理是将电泳和琼脂免疫扩散结合起来应用，即先将蛋白质抗原在琼脂内进行电泳，使分离成不同的电泳区带，然后在一定距离的抗体槽内加入抗血清，使进行免疫扩散沉淀反应，这样，每一电泳区带又可能产生一个以上的沉淀线条。因而此法克服了单纯琼脂扩散方法中的沉淀线重叠成束，不易鉴别的缺点，大大提高了琼脂扩散试验的分析能力。

某种可溶性抗原和相应抗体
1％ 离子琼脂 巴比妥缓冲液
电泳仪 电泳槽 打孔器 2 mm 直径的圆形薄壁金属管 开琼脂长槽用的手术小刀 毛细滴管或微量加样器 注射针头

1. 取清洁无划痕的普通载玻片，放在水平位置。

2. 用刻度吸管吸取溶化并已冷至 50～60℃ 的 1％ 离子琼脂 3.5～4 ml 左右，加在上述载玻片上，使均匀布满玻片，待凝固。

3. 用金属圆形管按图 1 打孔，用注射针头挑去琼脂。

图 1　免疫电泳琼脂板模型

4. 用毛细滴管或微量加样器在上孔加鸡血清，下孔加鹅血清。

5. 电泳

将琼脂板移至电泳槽上，电泳槽中放 pH 8.6 离子强度 0.075 mol/L 的巴比妥缓冲液，琼脂板的两端各用四层纱布与缓冲液搭桥。接通电源，电流为 4～6 mA/cm，电压为 10～12 V/cm。电泳时间为 45 min至 1.5 h，亦可在抗原中加些溴酚蓝作为标志，当溴酚蓝泳动到距琼脂板末端 1 cm 处，即关闭电源。

6. 取出琼脂板，用手术小刀按图 1 在中央挖一长槽，用注射针头挑去琼脂。

7. 在长槽中加入抗鸡血清的免疫血清，然后将琼脂板放入内有几层湿纱布的带盖搪瓷盘中，37 ℃ 下扩散 24 h。