抗原与免疫血清的制备实验

动物产生抗体的量，一方面可因动物的种类、年龄、营养状况及刺激部位的感受性的不同而不同外，另方面还与抗原的种类、注射量、注射途径、注射次数以及注射的间隔时间有关。

抗原量低到一定限度时，抗体不能产生或用现有方法不能测出，但超过最高限度对抗体的产生反起抑制作用。在最低限度以上，抗体根据抗原量的增加而增加，达到最高限度时，即不再增加。每种类型的抗原，其使用量都是根据经验而得出的。本实验的抗原是细菌细胞，采用每毫升中含 9 亿个细菌，比较恰当。抗原初次注射后，经一段诱导期，血清内即可找到抗体，以后逐渐上升，抗体量一般不高，然后逐渐下降。但再次注射时，抗体量迅速上升到最高水平，而且维持时间也长。因此，制备抗体一般需要多次注射抗原，才能得到高效价的免疫血清。注射途径最常用的是静脉。

24 h 培养的大肠杆菌斜面 2 kg 左右的健康雄家兔或未孕的健康雌家兔
硫柳汞 0.5％ 石炭酸生理盐水
McFarland 比浊管 乙醇棉花 碘酒棉花 消毒干棉花 灭菌吸管 毛细滴管 小试管 大试管 离心管 2 ml 和 20 ml 注射器 老编号 18 号与 24 号针头 灭菌细口瓶 离心机

1. 抗原的制备

1.1 吸取灭菌的 0.5％ 石炭酸生理盐水 5 ml，注入大肠杆菌斜面培养物上，将菌苔洗下。

1.2 用无菌毛细滴管吸取洗下的菌液，注入无菌小试管。

1.3 将此含有菌液的小试管放 60℃ 的水浴箱中 1 h，并不时摇动。

1.4 取一与比浊管同质量的小试管，加菌液 1 ml，再加石炭酸生理盐水 4 ml（或更多，视原菌液浓度而定），混匀后与各比浊管比浊。假若与第 3 管的浊度相等，则此菌液每毫升的细菌数为：

5×900 000 000＝4 500 000 000（45 亿）

附 McFarland 比浊管配制法 用同质量同大小的试管 10 支按下表加入药品。

1.5 稀释

用 0.5％ 石炭酸生理盐水将菌液稀释至每毫升含 9 亿个细菌。

1.6 无菌试验

将已稀释好的菌悬液接种少量于肉汤培养基内，培养 24～48 小时，观察有无细菌生长，如无细菌生长，即可放冰箱备用。

2. 免疫血清的制备

2.1 注射动物

2.1.1 用消毒注射器和 7 号针头抽取以上制备好的大肠杆菌抗原（抽取前摇匀），按下表所列剂量与日程注射家兔耳静脉。

2.1.2 第 14 日 自耳静脉采血 1 ml，分离血清，测其凝集效价，如合格即即可大量采血。

2.1.3 第 16 日 采血。

2.2 家兔心脏采血（见「动物采集血液实验」）

2.3 制备血清

2.3.1 采集的血液移入灭菌大试管（或平皿）后，尽量放成最大斜面，凝固后放人 4～6℃ 冰箱中，使其自然析出血淸。

2.3.2 用已灭菌的毛细滴管分出血清，若血清中带有红细胞，则须离心沉淀以去掉红细胞。然后将血清装入灭菌细口瓶中，并测定抗血清的效价。

2.3.3 加入防腐剂，使血清含有 0.01％ 硫柳汞。

2.3.4 用蜡或胶带纸封瓶口，贴上标签，注明抗血清名称，凝集效价及日期，放冰箱备用。