原理
用着色力强的染色剂孔雀缘或石炭酸复红，在加热条件下染色，使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内卡进入菌体的染料经水洗后被脱色，而芽孢一经着色难以被水洗脱当用对比度大的复染剂染色后，芽孢仍保留初染剂的颜色，而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色，使芽孢和菌体更易于区分。
材料与仪器
蜡样芽孢杆菌（约2d 营养琼脂斜面培养物） 球形芽孢杆菌（1～2 d 营养琼脂斜面培养物）
5% 孔雀绿水溶液 0.5% 番红水溶液
小试管 滴管 烧杯 试管架 载玻片 木夹子 显微镜
5% 孔雀绿水溶液 0.5% 番红水溶液
小试管 滴管 烧杯 试管架 载玻片 木夹子 显微镜
步骤
1. 制片
按常规涂片、干燥、固定。
2. 染色
加数滴孔雀绿染液于涂片上，用木夹夹住载玻片一端，在微火上加热至染料冒蒸气并开始计
时，维持 5 min。
3. 水洗
待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗，直至流出的水无色为止。
4. 复染
用番红染液复染 2 min。
5. 水洗
用缓流水洗后，吸干。
6. 镜检
干后油镜观察。
芽孢呈绿色，芽孢囊及营养体为红色。
注意事项
1. 加热过程中，要及时补充染液，切勿让涂片干涸。
2. 勿用流水对着菌膜冲洗。以免细菌被水冲掉。
来源：丁香实验
