原理
用着色力强的染色剂孔雀缘或石炭酸复红，在加热条件下染色，使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内卡进入菌体的染料经水洗后被脱色，而芽孢一经着色难以被水洗脱当用对比度大的复染剂染色后，芽孢仍保留初染剂的颜色，而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色，使芽孢和菌体更易于区分。
材料与仪器
蜡样芽孢杆菌（约2d 营养琼脂斜面培养物） 球形芽孢杆菌（1～2 d 营养琼脂斜面培养物）
5% 孔雀绿水溶液 0.5% 番红水溶液
小试管 滴管 烧杯 试管架 载玻片 木夹子 显微镜
5% 孔雀绿水溶液 0.5% 番红水溶液
小试管 滴管 烧杯 试管架 载玻片 木夹子 显微镜
步骤
1. 制备菌悬液
加 1～2 滴水于小试管中，用接种环挑取 2～3 环菌苔于试管中。搅拌均匀，制成浓的菌悬液。
2. 染色
加孔雀绿染液 2～3 滴于小试管中，井使其与菌液混合均匀，然后将试管置于沸水浴的烧杯中，加热染色 15～20 min。
3. 涂片固定
用接种环挑取试管底部菌液数环于洁净载玻片上，涂成薄膜，然后将涂片通过火焰 3 次温热固定。
4. 脱色
水洗，直至流出的水无绿色为止。
5. 复染
用番红染液染色 2～3 min, 倾去染液并用滤纸吸干残液。
6. 镜检
干燥后用油镜观察。
芽孢呈绿色芽孢囊及营养体为红色。
注意事项
所用菌种应掌握菌龄，以大部分细菌已形成芽孢囊为宜，取菌不宜太少。
来源：丁香实验
