富尔根氏核染色法

 

实验十一 富尔根氏核染色法

 

　　一、目的要求

　　学习并掌握富尔根氏（Feulgen）核染色的原理及方法。

　　二、基本原理

　　富尔根氏核染色法是根据席夫氏（Schiff）试剂进行的反应而建立的。席夫氏试剂含有碱性复红和亚硫酸，碱性复红与亚硫酸结合后，失去醌式结构而变为无色，当DNA经酸作用后生成的醛化合物与席夫氏试剂结合后，使醌式结构恢复，合成一种带紫红色的碱性复红衍生物。这个染色法对DNA具有特异性。细菌细胞用此法染色后，可在普通光学显微镜下观察到核。

　　富尔根氏染色法主要分两步：(a)将细菌用1mol/LHCl温和水解，使DNA中的嘌呤碱与戊糖分开，放出戊糖的醛基；(b)放出的戊糖醛基与席夫氏试剂作用后呈紫红色。

　　三、器材

　　1mol/LHCl，2％饿酸，Schandiun固定液，亚硫酸水溶液，席夫氏试剂，锇酸蒸气瓶；

　　酿酒酵母。

　　四、操作步骤

　　1．取培养8—10小时的酿酒酵母涂片，室温下风干。

　　2．将涂片置于有2％锇酸的蒸汽瓶口上，用锇酸蒸气固定5分钟，然后放入加热至60℃的Schandiun固定液中10分钟。

　　3．用水冲洗固定后的标本，然后放在60℃1mol/LHCl中水解8分钟，水洗。

　　4．用席夫氏试剂作用30—40分钟。

　　5．由席夫氏试剂中取出放在亚硫酸水溶液中洗5分钟。

　　6．由亚硫酸水溶液中取出水洗，干燥后，用油镜观察。

　　五、实验报告

　　根据自己实验的结果，绘图表示核的形态和位置。