提问
提问
我要登录
|免费注册
点赞
收藏
wx-share
分享

用ABCG2表达特性免疫分选角膜间质干细胞

相关实验:用流式法(FACS)分离间质SP细胞实验

最新修订时间:

原理

<link />

材料与仪器

2〜4代的间质细胞
PBSA BSA:PBSA+0.5%BSA PBSA 2FB:含2%FBS的PBSA 封闭缓冲液 抗体:MAB4155F 克隆5D3抗ABCG2-FITC 或同型抗体-FITC
具有488 nm氩激光器和525 20带通滤波器的高速细胞分选仪

步骤

(a)胰蛋白酶消化2〜4代的细胞并计数。


(b)400g离心,10min。


(c)PBSA/BSA洗一遍。


(d)加入10μL抗体(MAB4155F、克隆5D3抗ABCG2-FITC或同型抗体-FITC),30 min,置于冰上。


(e)用PBSA/BSA洗一遍后离心。


(f)用高压高速的细胞分选仪进行流式细胞分选术。488nm的氩激光发生器用于激发荧光素异硫氰酸盐,525/20带通滤波器用于测量发射光。用侧向散射对前向散射的双参数图上的门来除外细胞碎片。收集至少100000个细胞用于分析。


(g)分选出的ABCG2阳性和阴性的细胞群可以用于检测它们的集落形成率,干细胞标志性基因的表达,以及继续传代用于更进一步的研究和体内移植等。

<link />

注意事项

<link />

常见问题

<link />

来源:丁香实验

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
关注公众号
反馈
TOP
打开小程序