用流式法（FACS)分离间质SP细胞实验

实验分类：

细胞实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

来源：《人干细胞培养》

来源：丁香实验

操作方法

利用Hoechst33342外流性质分选角膜间质干细胞

(a)胰蛋白酶消化2〜4代的间质细胞。(b)细胞计数，用DMEM/2FB将细胞稀释至1×106个细胞/ml。(c）加入5μg/mL (Hoechst33342染料，37℃，90 min，每20 min搅动一次。(d)对照组细胞在加人Hoechst33342染料前，先加入50μg /ml维拉帕米孵育20min。(e)染色后，在4℃环境下用HBSS/2FB将细胞洗两遍并离心，之后在冰上用冷HBSS/2

用ABCG2表达特性免疫分选角膜间质干细胞

(a)胰蛋白酶消化2〜4代的细胞并计数。(b)400g离心，10min。(c)PBSA/BSA洗一遍。(d)加入10μL抗体（MAB4155F、克隆5D3抗ABCG2-FITC或同型抗体-FITC),30 min，置于冰上。(e)用PBSA/BSA洗一遍后离心。(f)用高压高速的细胞分选仪进行流式细胞分选术。488nm的氩激光发生器用于激发荧光素异硫氰酸盐，525/20带通滤波器用于测量发射光。用