备择方案2 制备用于等电聚焦的天然细胞样品

实验材料、试剂、仪器参见基本方案。

1. 制备细胞并进行渗透化处理和标记（见基本方案步骤 1～6)。

2.1 贴壁细胞培养。快速吸掉有渗透性的缓冲液，每孔中加入 100～250 μl 4℃ 预冷的双向-PAGE 裂解缓冲液，停止反应。每板使用不同的细胞刮片刮离细胞于缓冲液中，将细胞样品转移到新的旋盖离心管中。

2.2 悬浮细胞培养。室温，最大速度离心 1 min，迅速吸出并弃去上清。小心操作，切勿搅散细胞团块。加入100～250 μl 2 × SDS-PAGE 样品缓冲液到每管中，涡旋， 充分混匀。

3. 如果因 DNA 的影响样品很黏稠，可将拧紧管盖的样品管放入浴式超声仪中，冰浴， 超声作用 5 min。在干冰/乙醇浴中冷冻样品，然后在冻干机上冻干。

4. 将冻干样品重溶于 50～100 ml 的双向-PAGE 样品缓冲液中。加热样品至 37℃， 3～5 min，将10～20 μl 的样品加到制备好的等电聚焦电泳胶上。