渗透细胞蛋白磷酸化实验

实验试剂及仪器具体要求见「其他」。1. 贴壁细胞培养：1.1 实验前约 1 h，将待标记细胞的培养液换为含有 20 mmol/L HEPES 的平衡培养液。重新放入培养箱，用新培养液平衡细胞。1.2 将细胞培养皿置于 37℃ 水浴中 10 min, 再次平衡细胞。吸弃皿中培养液，用 10 ml 37℃ 预热的胞外缓冲液迅速冲洗细胞 2 次，吸尽胞外缓冲液，加 0.5~2 ml 的有渗透性的缓冲液于

实验材料、试剂、仪器参见基本方案。1. 制备细胞并进行渗透性处理和标记（见基本方案步骤 1~8）。2.1 贴壁细胞培养。快速吸尽有渗透性的缓冲液，在每板中加入 100~250 ℃ 预冷的 2 × SDS-PAGE 样品缓冲液，停止反应。每板使用不同的细胞刮片迅速刮离细胞于缓冲液中，转移细胞样品至新的旋盖离心管中。2.2 悬浮细胞培养。在微量离心反应管中以最大速度离心 1 min, 室温。迅速吸尽上

实验材料、试剂、仪器参见基本方案。1. 制备细胞并进行渗透化处理和标记（见基本方案步骤 1～6)。2.1 贴壁细胞培养。快速吸掉有渗透性的缓冲液，每孔中加入 100～250 μl 4℃ 预冷的双向-PAGE 裂解缓冲液，停止反应。每板使用不同的细胞刮片刮离细胞于缓冲液中，将细胞样品转移到新的旋盖离心管中。2.2 悬浮细胞培养。室温，最大速度离心 1 min，迅速吸出并弃去上清。小心操作，切勿搅散