备择方案2 大量制备杂交瘤或细胞系
最新修订时间：
原理
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材料与仪器
步骤
1. 同备择方案 1 中大规模制备 MAb 上清的步骤 1～4，但等细胞长到合适的密度时就应收获细胞，或者是在细胞生长的平台期收获。
2. 将细胞倒入无菌的 250 ml 锥形离心管中，于 4℃ 250 g 离心 15 min, 弃上清，置细胞沉淀于冰上。
3. 将 10 瓶细胞沉淀用 4℃ 的 PBS 250 ml 重悬，合并到一个试管中，4℃ 250 g 离心，弃上清。
4. 重复以上步骤，最终把细胞合并到一管中，细胞经过 3 次洗涤后，可以进一步加工 (如细胞裂解、放射性标记)。
<link />注意事项
估计所需细胞的数量，此过程将产生大约 106 细胞/ml，将细胞转到数个 175 cm2 培养瓶中，以便制备所需数量的细胞（每个 175 cm2 培养瓶的培养物将加到 2.4 L 的培养液中）。通过肉眼观察培养液的颜色和混浊度，并通过每天选几瓶细胞进行细胞计数及检测细胞活力等方法来估计收获的时间。勿使细胞过度生长，否则细胞活力将急剧地下降。
<link />常见问题
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来源：丁香实验
