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基本方案

最新修订时间:

原理

材料与仪器

目的杂交瘤
完全 DMEM-10 培养液(含 5~10 mmol/L HEPES pH 7.2~7.4)
50 ml 无菌锥形离心管 175 cm2 组织培养瓶

步骤

1. 将杂交瘤置于一个盛有完全 DMEM-10 培养基的 175 cm2 组织培养瓶中,放入 37℃ CO2 培养箱,直至生长旺盛适于分传。


2. 按 1:10 的比例将细胞分传到一个新的 175 cm2 的培养瓶中,加入完全 DMEM-10 培养液到总体积为 100 ml,并置 37℃ CO2 培养箱中直至细胞过度生长,此时溶液变酸(变黄色),细胞死亡(约 5 天)。


3. 将培养瓶中的内容物转移到无菌的 50 ml 的锥形离心管中,室温下 1500 g 离心 10 min, 收集上清。用 ELISA 法或用流式细胞仪检测 MAb 上清的滴度。


4. 将上清无菌保存,在 4℃ 时通常可稳定地存放数周至数月;在 -20℃ 时可存放数月至数年;-70℃ 时可永久保存。分装成数份冻存。尽量避免反复冻融。

注意事项

当细胞密度达到 1×106~2×106 细胞/ml 时,大多数细胞系需要分传至新的培养液或新的培养瓶中。监控组织培养瓶中的细胞活度、污染及密度。细胞不能长得过密,否则会死亡,这种细胞濒死的状况会增加细胞表型改变的可能性。

常见问题

如果上清滴度很高,则该杂交瘤可用于大规模纯化制备或用以产生腹水。

来源:丁香实验

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