单克隆抗体上清制备实验

目的杂交瘤
完全 DMEM-10 培养液（含 5～10 mmol／L HEPES　pH 7.2～7.4）
50 ml 无菌锥形离心管 175 cm2 组织培养瓶

1. 将杂交瘤置于一个盛有完全 DMEM-10 培养基的 175 cm² 组织培养瓶中，放入 37℃ CO2 培养箱，直至生长旺盛适于分传。

2. 按 1:10 的比例将细胞分传到一个新的 175 cm² 的培养瓶中，加入完全 DMEM-10 培养液到总体积为 100 ml，并置 37℃ CO2 培养箱中直至细胞过度生长，此时溶液变酸（变黄色），细胞死亡（约 5 天）。

3. 将培养瓶中的内容物转移到无菌的 50 ml 的锥形离心管中，室温下 1500 g 离心 10 min, 收集上清。用 ELISA 法或用流式细胞仪检测 MAb 上清的滴度。

4. 将上清无菌保存，在 4℃ 时通常可稳定地存放数周至数月；在 -20℃ 时可存放数月至数年；-70℃ 时可永久保存。分装成数份冻存。尽量避免反复冻融。

当细胞密度达到 1×10⁶～2×10⁶ 细胞/ml 时，大多数细胞系需要分传至新的培养液或新的培养瓶中。监控组织培养瓶中的细胞活度、污染及密度。细胞不能长得过密，否则会死亡，这种细胞濒死的状况会增加细胞表型改变的可能性。

如果上清滴度很高，则该杂交瘤可用于大规模纯化制备或用以产生腹水。