材料与仪器
麻醉剂 DNA 疫苗溶剂 乙醇
吸管 针头 电子剪切机 棉球或纱布垫
步骤
1.通过腹腔注射 0.3 ml/18~20 g 总体重麻醉剂麻醉一只小鼠,使用 26 G 针头的 1ml 注射器。这将使小鼠麻醉 15~20 min。
2.用 28G 针头的 0.3 ml 注射器装人足够的 DNA 疫苗进行免疫(一般 50ul/腿,100ul/鼠)。
3.将小鼠背朝下头抬高(腾出地方可以抓住它颈部的皮肤),刮去四头肌上的毛。
4.用一只手抓住它颈部的皮肤使之无法活动,用另一只手抓住脚至踝关节处并使之于膝盖处弯曲,这样易于四头肌的注射。用棉球蘸 70% 乙醇湿润四头肌及其周围。如果可能的话,两人操作。
5.45°,2~3 mm 注射四头肌,如果针头触到大腿骨说明扎得过深,慢慢地注射 DNA 疫苗溶液,之后慢慢拔出针头,如果注射正确的话将可以看到或感到肌肉部位的肿大。
6.在另一个四头肌处重复注射操作。
备选方案 3 对小鼠通过 anteriortibialis 的肌肉注射进行 DNA 疫苗管理
对 anteriortibialis 进行预防接种在基本方案 4 中有演示,除了膝盖到踝关节外侧已经被准备并注射了。在给注射器装液之后(50jul/腿,注射两只腿),针头套有 0.38 mm-i.d. 的聚乙烯管所以只有斜面的针被暴露。DNA 溶液以适中的压力稳定注射。由于适当的接种深度被控制确保其可以进入肌肉中心,所以这个方法具有良好的再生能力。
来源:丁香实验