基本方案2 反转录酶病毒感染初级成肌细胞

最新修订时间：2024-05-13

材料与仪器

培养基中的主要成肌细胞
筛选逆转录病毒上清溴化己二甲铵
6孔板或60mm 有胶原涂层的组织培养板配备了微量培养板的台式离心机

步骤

$1.在37°C,5%C〇2，F-10/DMEM-based初级成肌细胞培养基中，用^孔或者6〇mm胶原质包被的培养皿培养初级成肌细胞直到细胞汇合度约为10%(基本方案D。细胞在感染时应该为圆的状态。确定细胞有生长2?3d的足够空间，但不要铺的太稀，那样他们生长不好。~? 2?用8C%g/mlPolybrene表面补充未稀释的反转录酶病毒达到最终浓度为SjugZmI。将被感染细胞的培养基弃去，加入病毒上清液。.将细胞放回培养箱中约15min平衡C〇2，然后将皿小心地包在Parafilm里。 3.1100尽，32〇离心3〇111丨11。弃去病毒上清液，加人1^-10/〇]\/11^^^56〇1初级培养基，并将皿放回至培养箱中。 4.用新的病毒上清液重复第2?3步，每次8h,尽量多的次数。在一次感染之后，感染效率开始为60%?90%;4次感染之后很快达到1〇〇%。 5.可选的：如果病毒带的ZacZ受体基因被用了，通过FACS分选准备高表达的ZacZ分组细胞（支持方案）$

来源：丁香实验