基本方案3 无放射性的多重分析SSLP

最新修订时间：2024-05-13

材料与仪器

试剂、试剂盒	混合引物底物缓冲液 TBE 缓冲液检测缓冲液 Qiaex Gel Extraction Kit (Qiagen）预杂交液 Taq DNA 聚合酶 10XPCR扩增缓冲液碱性磷酸盐连接的抗地高辛Fab片段 M13序列泳道内标 2X 甲酰胺载样缓冲液 Oligo 清洗缓冲液地高辛标记的探针 CSPD 轻矿物油阻滞液
仪器、耗材	0.2ml 薄壁 PCR 管自动放射自显影胶片 Blotting 滤纸杂交烤箱 96孔板测序胶转移装置摇床透明的塑料胶片

步骤

支持方案1 制备 MI3 序列内标

2. 加以下成分到冷却的退火混合液中： 20jA 0.lmol/L D T T ； 8M17. 5jumol/L 4dNTP 混合液； 32^1 H 2O 5 , 454 T E 缓冲液； 5“测序T 7 D N A 聚合酶。室温下放置7m i n 。 3. 预热一个1.5c m 的微量离心管，管中有200^1的终止混合液，加人第2 步的混合液， 37° C 孵育5min。加人32 0 ^ 的 2X 甲酰胺载样缓冲液终止反应。可无限期地保存于 —20〇 C 。