免 疫 球 蛋 白 M(IgM)和 免 疫 球 蛋 白 D(IgD) 的纯化

基 本 方 案 1 用透析和凝胶过滤层析法纯化 IgM

此 法 纯 化 的 IgM 可达到较好纯度，可用于酶解、异 硫 氰 酸 盐 荧 光 素（FITC) 标记 、生物素标记或放射性标记。

材 料（带 V 项 目 见 附 录 1)

腹 水 或 单 克 隆 抗 体（MAb) 上 清（单 元 1.4)

PBS

Sorvall离心机， SS-34型 转 子（或类似转子）

透析袋

26 mmX900 mm 层析柱，填有适当凝 胶 过 滤（SE) 树 脂（CPI 附 录 31)

1.单 元 L 5 离心和去除IgG中脂类物质的方法纯化腹水上清，若 是 M Ab上 清 ，室温或 4℃， 15 000g离心30min，去除细胞碎片，保留上清。

2.将澄清的腹水或MAb上清转至透析袋中，在 4°C 下用≥1 0 倍样品体积的蒸镏水透析24 h，在室温或4°C下将透析好的溶液以 15 000〜20 OOOg 离 心 lh ，弃去上清。

3.将填有 SE 树 脂 的 26 mmX900 mm层 析 柱 用 PBS 平 衡（CPI附 录 31)，用≤5 mlPBS溶解步骤 2 中的沉淀并上样，用 PBS 洗脱蛋白质并收集 100 个 组 分（1 % 柱体积）。

4.测 A₂₈₀。值 确 定 IgM 浓 度（表 1.5.1)。将含有纯 IgM 的 洗 脱 液 合 并（第一个洗脱峰）。用 1 0 % SDS 还原聚丙烯酰胺凝胶鉴定 IgM 纯 度（单 元 12. 3)。视使用的凝胶装置而定上样量，为 1〜80ul。电泳上 IgM 显示二条带，在 78kDa 处 的 重 链 带 和 25kDa 处的轻链带。

5.溶于 PBS 中浓度为 1〜20m g/m l 的 IgM 可 于 4°C 或 一 70°C (不能冻融）保 存 数 月 ，若 IgM 出现沉淀，可用更髙离子浓度的缓冲液再溶解（如 加入 NaCl)。