方案10 胶体考马斯亮蓝染色实验

1.将凝胶置于玻璃或塑料培养皿中固定，轻轻摇动至少 1h。

可将凝胶固定过夜。如果凝胶有标记，多个凝胶可在同一培养皿中固定，固定液的体积应足够大，以使所有凝胶都能自由移动。

2.移走固定液，在摇床上用水清洗凝胶 10 min。

3.弃去水，重复洗 2 次。

4.在洗第三次时，将 4 份考马斯亮蓝储备液和 1 份甲醇混合，以制备胶体考马斯亮蓝染液。

5.将凝胶放在 100~300 ml 胶体考马斯染料内（染料的体积依胶的大小而定，确保染料覆盖凝胶）。在往复式或定轨式摇床上，轻摇过夜。

凝胶应在染料中放置足够长时间，其颜色会持续加深一直到第七天。

6.去除残留染料，将凝胶转移至盛有 45~55°C 双蒸水或去离子水的干净平皿中。

当水变色时弃去，再次用新的 45~55℃的 H₂O 轻轻摇晃清洗凝胶。重复几次，直到蛋白质带较凝胶背景变得明显，蛋白质将在清晰的背景上出现蓝色。

7.凝胶可用于扫描分析。扫描湿凝胶较好，因为若凝胶干燥易破裂，导致数据的丢失。

8.在干燥之前，将凝胶浸在 5% 甘油中 30 min，凝胶也可装在密封塑料袋内，储存于 4°C。