方案4 双向凝胶电泳脑脊液蛋白样品的制备实验

1.在室温下解冻脑脊液样品。当样品解冻后，旋紧试管盖，再用旋涡混合器振荡试管。

2.样品溶解时，在 15 ml 离心管及盖上标记所处理样品的名称

3.将 1 ml 脑脊液和 9 ml 乙醇加人 15 ml 离心管中混合。

注意：脑脊液可能是生物危险品。将用过的吸头、试管和手套放在适当的容器中，用 1mol/L NaOH 认真地清洗污染表面。

4.将离心管的盖拧紧，振荡，-20°C 储存过夜。

5.5000 g 4°C，离心 5 min。

6.将上清倒入指定的废物缸。在不吸出沉淀的前提下，用 200ul 吸头尽可能转移走剩余的乙醇，不让吸头接触沉淀。

7.将离心管放在通风橱在空气中干燥 10~20 min，但不能让沉淀彻底干燥。

8.在每个试管中加人 100ul 增溶溶液，加 24 泠巯基乙醇，旋紧试管上的盖，用旋涡混合器振荡试管，在室温下放置 30 mm。

9.超声处理样品 30s。

10.5000 g、4°C，离心 5 min。

11.将每份上清液转移到新试管中，检测每份上清的蛋白质浓度。

蛋白质浓度会随脑脊液样品的不同而变化，但是使用 25W 的这种溶液，就能通过银氨染色的双向凝胶电泳有效检测到蛮白质。

12.若样品不立即用于 IEF，将其按每份 100ul 分装，储存在一 80°C。样品的冻融只能进行一次，以避免多次反复冻融所产生的副作用。

13.继续按方案 5 进行第一向 IEF。