方案3 用于免疫印迹的动物培养细胞、酵母和细菌的裂解实验

1.将1X10⁷~5X10⁷个细胞加到1ml含有100 mmol/L DDT的Laemmli样品缓冲液中。

2.由于DNA的释放，在Laemmli缓冲液中细胞裂解液变得很黏，克服黏性问题有2种方法：

(1)离心裂解液lOOOOOg，20 min，除去DNA;

(2)超声破碎裂解细胞，每次超声15?30s，共4次，每次之间将样品在冰上放置15s。

3.在95°C水浴加热样品5 min。

4.20000 g离心5 min。

5.转移上清到一个新管中。

6.样品（上清）现在可以用于电泳（见方案1)和免疫印迹（见HarlowandLane，1999)。在免疫印迹研究中，制备培养细胞提取物时，蛋白样品必须满足以下条件：

（1）溶于适合凝胶电泳系统的溶液中（如，溶液的pH值应该在7.0左右，并且盐浓度为200 mmol/L左右）；

（2）蛋白浓度不能超过特定凝胶系统的承载能力（凝胶电泳变量的讨论见第2章）。对于传统凝胶，小胶的每个泳道的上样量不能>150ug 的总蛋白。