步骤

此方法源自 Barker 和 Ip(1963)。

一、固定

在新配制的含水合三氯乙醛 lg、95% 乙醇 45 ml、蒸馏水 50 ml 和浓硝酸 ImI 的溶液中放 5d。

二、冲洗

在流水中放 24 h。

三、碱化

在含 95% 乙醇 25 ml、巴斯德移液管 1 滴氨水（比重 0.88, 约 35%w/w) 中放 24 h(这是原始的方法，可以根据系统需要和经验确定最佳 pH)。

四、银染

吸去和排掉过剩液体，肌肉在 37℃ 1.5%w/w 硝酸银中孵育 4d（时间对于成功与否至关重要。鉴于以前的文献作者研究大的肌肉，本研究给出的值不同于原始的文献。数年前，在遇到了染色不充分的问题后，笔者对实验方法中所有重要的步骤都进行了改良，虽然在某种程度上可以通过改变硝酸银的浓度来弥补染色不充分的问题，但到目前为止，显然最重要的是银染过程，尤其是银染的时间。银染时间太短，导致广泛着色，特别是细胞核，因此使轴突的染色不明显，同样也证实了 Palmgren 所观察到的结果 (1960)。或许正好与直觉相反，银染时间太长，导致组织的整个区域不被着色，包括轴突，而小的区域被强染色。这些研究证明，以上描述的不同的银染是一个动态的过程，没有一个稳定的终点。因此，在处理一个新的标本时，有必要采用重^的方法，首先决定正确的时间，然后通过观察染色的质量调整时间。对于任何特定的标本，根据笔者的经验，通过系统的试验，选择最佳时间，几乎总能给出极好的或至少令人满意的结果。）

五、还原（显影）

在新配制的含对苯二酚 2 g 和 25% 蚁酸 IOOml 的溶液中放 2d(倘若时间足够长，确实到达了一个稳定的终点)。

六、清洗

1.在蒸懐水中漂洗。

2.在分离组织前放入甘油中清洗数日和储存。

七、包埋

用一个树酷围成的圆形盖玻片分离放在甘油中的肌梭和肌间神经

结果

在一个精细染色的标本中，轴突和它的终末在灰黄色（稻草色）到淡灰色的背景下呈黑棕色或几乎呈黑色，在背景下可能很难区分出核，但常常可见肌节、髓鞘在正常情况下不着色，但由于轴突中相应部位的缩窄，雷诺氏节的位置清晰。在高分辨率的情况下，常可观察到还原的银沉积呈纤丝状或细丝状的特征。此外，并非整个轴突都会着色，特别是不能完整地观察到延伸的感觉末梢，详见 Banks(1994)。